Wakosil-II 5C18-100 充てん剤が最適となります。

有機溶媒取扱業務に従事する作業者の健康管理のために、特殊健康診断が年 2 回実施されています。体内に吸収されたトルエン、キシレン、スチレンは代謝されて、それぞれ馬尿酸、メチル馬尿酸、マンデル酸となり尿中に排泄されます。これらの代謝物とクレアチニンは、100 倍希釈尿を直接 HPLC に注入することにより分離定量が可能となります。

カラムサイズをコンパクトに、金属イオンとキレート形成能を有するマンデル酸のピーク形状をよりシャープに検出するためにも保持特性が大きく、しかも高純度シリカゲルを原料とした Wakosil-II 5C18-100 充てん剤が最適となるわけです。

図 1. に Wakosil-II 5C18-100、カラムサイズ 4.6 mm * 100 mm を用い移動相の pH3.0、分析温度 40 ℃で測定した場合のクロマトグラムと、定量時の各成分の再現性データを表 1. に示しましたが、いずれの場合も満足できる結果が得られています。また標準検体を用いたカラムの耐久性テストにおいても 1000 回をクリアーしており、十分に実用性のある分析方法だと確信しています。

表1. 馬尿酸分析の再現性

	MA	HA	o-MHA	p-MHA	m-MHA	Creatine
1	112218	96473	145709	148837	178486	159941
2	111901	96372	145063	148806	177300	158725
3	112312	96997	145876	150056	178775	159176
4	112849	96328	144972	149031	178319	159707
5	111138	95428	143733	147321	176521	157175
6	110503	94998	142859	146667	174945	156048
7	111251	95727	143958	148376	176995	157018
8	110209	94501	142606	145556	175156	156014
9	111288	95711	144117	147918	177127	156740
10	110823	95078	142841	146925	175570	155628
11	111694	95819	144093	147696	177085	157094
12	110983	95130	143297	147076	174837	156984
13	111453	95862	144205	147755	176913	157053
14	110913	95255	143502	146661	175575	155734
15	110306	94602	142555	146434	174799	154919
16	110937	95066	143222	147116	175483	155527
17	110535	94693	142705	145930	175189	155126
18	110606	94788	143323	146634	175448	155062
19	111231	95626	143745	147474	176416	156723
20	110770	95171	145720	146852	175678	155409
mean	111196	95481	143905	147456	176331	156790
SD	703	683	1068	1124	1252	1533
CV%	0.63	0.72	0.74	0.76	0.71	0.98

クレアチニンを通常の生化学自動分析装置で測定する場合には、HPLC での同時分析の必要がなくなるため、本分析系からイオンペアー試薬（SDS・Na）を除いて分析が可能になります。この場合、分析時間が約 5 分短縮されます。

測定波長は通常 UV ; 210 nm が使用されますが、ベースラインの安定性などに問題がある場合には、UV ; 235 nm 付近まで実用上なんの支障もなく使用可能となります。参考のため図 2. に UV ; 210 nm と 234 nm で測定したクロマトグラムの比較を示します。

移動相の調製の際、β-シクロデキストリン（β-CD）が溶けにくい場合があります。この場合は、スターラ攪拌下、リン酸バッファーの中に少量ずつβ-CD を添加する方法が有効になります。以降、0.45 µm 程度のメンブランフィルターで濾過されることをお薦めします。