PCRインヒビタークリーンアップキット PCR Inhibitor CleanUp Kit

PCR Inhibitor CleanUp Kitは、PCRや逆転写反応（RT-PCR）などの核酸増幅反応を阻害する物質を、核酸溶液から効率的に除去するためのキットです。
本品は、AC Slurry とFilter Columnから構成され、AC Slurryに含まれる活性炭や親水性ポリマーにより、核酸溶液に含まれる腐植物質（フミン酸）、ポリフェノール、タンニン、メラニン、多糖類、色素などのPCR阻害物質を吸着して除去することができます。カラムにAC Slurryを充てんし、核酸溶液を添加して遠心するだけの簡単な操作で、PCRやRT-PCRなどのアプリケーションに使用できます。

特長

• 約10分間の簡単操作
• 精製した核酸溶液はそのままPCRや逆転写反応の鋳型に使用可能
• 酵素反応を阻害するフミン酸、ポリフェノール、タンニン、メラニン、多糖類、色素などを除去

操作手順

1. AC Slurryのボトルを10秒以上転倒混和してよく分散させる。
   ボルテックスミキサーを使用するよりもよく混合できます。 ボトルは必ず上下に転倒混和し、ボトルの底に充てん剤が残っていないことを確認してください。
   よく分散させたら、沈降が始まる前（２分以内）に次のステップに進んでください。
2. AC Slurry 850 µlを広径ピペットチップでFilter Columnに添加する。
   内口径φ1.5 mm未満のピペットチップを使用した場合、チップ内で目詰まりする可能性があります。AC Slurryがよく混合された状態を保持するため、添加後直ちに次のステップで遠心を行ってください。
3. 遠心（8,000 x g、3分間、室温）し、ろ液は捨てる。
   遠心後、充てん剤の層がカラム内に形成されます（充てん済みカラム）。白色の粉末が混ざっているように見える場合もありますが、使用には問題ありません。

   

4. 充てん済みカラムを新しい1.5 mlマイクロチューブの上に移す。
5. 核酸溶液 50-200 µl をカラムに添加する
6. 蓋を閉め、室温で1分間静置する。
   すぐに遠心しないで1分間（～3分間）静置してください。
7. 遠心（8,000 x g、3分間、室温）し、ろ過された核酸溶液を回収する。
   得られた核酸溶液はPCRやRT-PCRなどの鋳型としてそのまま使用できます。

実験例1　PCR阻害が見られるイチゴ葉DNAのクリーンアップ

ポリフェノールを多く含むイチゴの葉から、簡易抽出試薬Template Prepper for DNA (Code No. 316-08911)を用いて回収したDNA溶液（遠心上清液）を、本品とA社品のプロトコールに従ってカラム精製を行った。

結果

着色が見られたDNA溶液は、本品で処理することで着色成分が取り除かれた。 PCR増幅も確認され、PCR阻害物質がDNA溶液から除去されたことが示唆された。

実験例2　PCR阻害が見られる土壌DNAのクリーンアップ

腐植物質を多く含む土壌から、ISOSPIN Soil DNA（Code No.310-09151）を用いてDNAを抽出した。得られたDNA溶液を希釈せずにPCRを実施すると酵素反応に阻害が見られたため、本品とA社品のプロトコールに従ってカラム精製を行った。

結果

本品で精製したDNA溶液は、吸光度比260/230値が処理前より大きく改善され、他社キットよりも高い値を示した。また、5倍希釈、10倍希釈する前の鋳型DNA濃度においてもPCRによる増幅産物が確認された。