アイソヘアー イージー ISOHAIR EASY

本品（アイソヘアーイージー）は、毛根から簡便にDNA を抽出するための試薬です。 抽出したDNA 溶液は、精製をしないでそのまま核酸増幅法の鋳型として利用することができます。

特長

• ヒトの毛根からDNA抽出が可能
• 操作が簡便で約30分間で抽出可能

検体の準備（エタノールによる毛髪の洗浄）

1. 毛髪3本（毛根付）を採取し、毛根部から1.5 cm程度にハサミ等で切断する。
   ※採取した毛髪に毛根があることを確認（右図）。^*1
2. エタノールを300 μl注いだ1.5 ml容チューブの中に、ピンセット^*2 で毛根部を3本入れる。
3. 数回転倒混和して簡単に洗う。毛根部を取り出した後、ろ紙やキムワイプなどの上にのせてエタノールを蒸発させる。

核酸の抽出

1. ISOHAIR EASYを室温に置いて融解し、転倒混和で均一にした後、スピンダウンして氷上に静置する。
2. 0.2 ml容チューブにISOHAIR EASYを50 μl注ぎ、準備した毛根部3本をチューブの中に入れる。
3. インキュベート
   55°C、20分間インキュベート^*3
   94°C、10分間インキュベート
   氷上に置いて速やかに4°Cに冷却
4. ピペッティングして混合した後、不溶物を取らないように上清を1.5 ml容チューブに移し、DNA抽出液とする。^*4
   ※本品の使用で、毛髪3本から1～6.5 ng/μl のDNAが抽出されることを確認しております。^*5

*1　毛根が目視で確認できない検体や自然脱毛した検体では、十分な核酸が得られない場合があります。
*2　コンタミネーションを防ぐため、ピンセットは使用する毎にエタノールで洗浄して下さい。
*3　毛髪をISOHAIR EASY中でインキュベートした際は、見た目上ほとんど変化しませんが、実際にはDNAが溶出しています。
*4　不溶物が浮いて上清が取りにくい場合、0.2 ml容チューブの耐遠心力は低いため1.5 ml容チューブに一度全量を移してから遠心(12,000 rpm x 2 min)し、上清を分取して下さい。
*5　毛髪から得られるDNA量は、個人の髪質によって差があり、たとえ同一人物でも毛髪1本1本によって差があります。

リアルタイムPCR法の利用

ISOHAIR EASYを用いてA、B、C 3人の毛髪各3本から調製したDNA抽出液 2 μlを鋳型にして、GeneAce SYBR^® qPCR Mix α No ROXを用いてリアルタイムPCRを行い、Gap遺伝子(GAPDH)を検出した。（装置：LightCycler^® 96）

反応液組成

反応条件

＜結果＞

LAMP法の利用

ISOHAIR EASYを用いてA、B 2人の毛髪各3本から調製したDNA抽出液4 μlを鋳型に、等温遺伝子増幅用試薬(Isothermal Master Mix)を用いてLAMPプライマーセットで標的領域(IL28B遺伝子)の増幅を行い、その増幅産物に対して会合曲線解析を行った。（等温増幅蛍光測定装置：Genie^® II）

＜結果＞

Q：ISOHAIR（Code No. 315-03403）とISOHAIR EASY（Code No.319-07781）の違いは？

A：「ISOHAIR」と「ISOHAIR EASY」には下記のような違いがあります。ISOHAIR EASYは毛根から簡便にDNAを抽出できますが、必ず毛根部があるサンプルを使用する必要があります。