(R)-BiAC法（キラルアミノ酸 LC/MS分析）
アミノ酸は生体内や天然に広く存在する化合物です。アミノ酸には鏡像異性体であるL-アミノ酸及びD-アミノ酸がありますがほとんどがL-アミノ酸として存在しています。近年、微量に存在するD-アミノ酸の、記憶・学習能力への関与1)等の機能性が明らかにされ、L-アミノ酸と分離分析する重要性が高まっています。
(R)-BiACは、D/L-アミノ酸(キラルアミノ酸)をLC/MS (プレカラム誘導体化法)で分析する際の誘導体化試薬です。(R)-BiACと誘導体化試薬セットを用いることにより、高分解度・短時間（19分）かつ、専用機器を用いずにキラルアミノ酸分析を行う事ができます。
- Hashimoto, A., Oka, T.: Prog. Neurobiol., 52, 325 (1997).
特長
✓専用装置を用いずに、LC/MSでキラルアミノ酸 (D-アミノ酸、L-アミノ酸)を測定可能！
(R)-BiACを用いプレカラムで誘導体化を行うことで、専用の装置を用いることなくLC/MSでキラルアミノ酸 (D-アミノ酸、L-アミノ酸)を測定することができます。
✓20種類のD/L-アミノ酸を約19分で一斉分析可能！
多成分のキラルアミノ酸 (D-アミノ酸、L-アミノ酸)を短時間で一斉分析することが出来ます。
✓キラルアミノ酸 (D-アミノ酸、L-アミノ酸)を高感度で検出可能！
MSでのイオン化効率が高く、atto molレベルの感度でキラルアミノ酸 (D-アミノ酸、L-アミノ酸)を検出することが出来ます。
✔誘導体化に必要な専用試薬セットをご用意！
調液済みの(R)-BiAC誘導体化試薬セットをご使用いただくことで、誘導体化操作をより簡便に行うことが出来ます。
(R)-BiAC誘導体化試薬セットを用いた誘導体化手順
(R)-BiAC誘導体化試薬セットの内容
| 製品コード | 品名 | 容量 | 本数 |
|---|---|---|---|
| 293-86011 | (R)-BiAC用緩衝液 | 3 mL | 1 |
| 290-86021 | 反応停止剤 | 10 mL | 1 |
(R)-BiAC誘導体化試薬セット以外に必要な試薬類
| 製品コード | 品名 | 規格 |
|---|---|---|
| 012-19851 | アセトニトリル | LC/MS用 |
| 025-19761 | (R)-BiAC | アミノ酸分析用 |
| 235-64051 | Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D) | - |
試薬の調製方法
1. (R)-BiAC試液
(R)-BiAC 1本全量 (5 mg)をアセトニトリル1～2 mLで洗いこみ、別容器に移した後、全量が5 mL になるようにアセトニトリルを加えて混合し、完全に溶解します。※
※調製した溶液は必要数に小分けした後、冷凍で保管し、凍結融解の繰り返しは避けて、なるべく早く使用して下さい (-20℃で1週間程度保管可能)。
2. (R)-BiAC用緩衝液-アセトニトリル溶液
(R)-BiAC用緩衝液の容器にアセトニトリル3 mLを加え混合します。
誘導体化
調製
- サンプル溶液 15 μL + (R)-BiAC用緩衝液-アセトニトリル溶液 30 μL + (R)-BiAC試液 10 μL (誘導体化試液)
- ピペッティング × 5
反応
- 攪拌
- 加温 (55℃, 10 min.)
- 冷却 (室温)
反応停止
- 誘導体化試液 + 反応停止剤 100 μL
LC/MS測定
ヒト尿中キラルアミノ酸の分析例※
前処理条件
- サンプル/標準溶液 20 μL + 内部標準溶液 20 μL + アセトニトリル 40 μL
- 攪拌
- 遠心分離 (20,000 × g, 10 min.)
上澄回収 20 μL
誘導体化
13種キラルアミノ酸の分析例 (使用カラム: Wakopak® Ultra APDS TAG®)
LC/MS/MS Chromatogram (標準溶液 (D-アミノ酸: 5 μM L-アミノ酸: 50 μM))
LC/MS/MS Chromatogram (ヒト尿サンプル)
| 成分名 | 検出イオン (m/z) | 成分名 | 検出イオン (m/z) | 成分名 | 検出イオン (m/z) | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Precursor | Product | Precursor | Product | Precursor | Product | |||
| D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
| L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
| D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
| L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
| D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
| L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
| Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
| D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
| L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
| D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
[Instrument]
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
[HPLC]
- Column temperature
- ： 40℃
- Eluent
- ： A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
- Gradient
- ：
Time (min.) B conc. (%) 0-3 14-16 3-14.3 16-33 14.3-17 33-45 17-17.1 45-90 17.1-18 90 18-18.1 90-14 18.1-20 14
- Flow rate
- ： 0.4 mL/min.
[MS]
- Ionization
- ： ESI
- Mode
- ： SRM
乳酸菌飲料中キラルアミノ酸の分析例※
前処理条件
- サンプル/標準溶液 20 μL + 内部標準溶液 20 μL + アセトニトリル 40 μL
- 攪拌
- 遠心分離 (20,000 × g, 10 min.)
上澄回収 20 μL
誘導体化
13種キラルアミノ酸の分析例 (使用カラム: Wakopak® Ultra APDS TAG®)
LC/MS/MS Chromatogram (標準溶液 (D-アミノ酸: 5 μM L-アミノ酸: 50 μM))
LC/MS/MS Chromatogram (乳酸菌飲料サンプル)
| 成分名 | 検出イオン (m/z) | 成分名 | 検出イオン (m/z) | 成分名 | 検出イオン (m/z) | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Precursor | Product | Precursor | Product | Precursor | Product | |||
| D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
| L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
| D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
| L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
| D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
| L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
| Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
| D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
| L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
| D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
[Instrument]
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
[HPLC]
- Column temperature
- ： 40℃
- Eluent
- ： A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
- Gradient
- ：
Time (min.) B conc. (%) 0-3 14-16 3-14.3 16-33 14.3-17 33-45 17-17.1 45-90 17.1-18 90 18-18.1 90-14 18.1-20 14
- Flow rate
- ： 0.4 mL/min.
[MS]
- Ionization
- ： ESI
- Mode
- ： SRM
※本データは分析例です。使用する装置によって、イオンソースのパラメーター等が異なる場合がございます。
参考文献
- Harada, M. and Karakawa, S. et al.: J. Chromatogr. A, 1593, 91 (2019).
- Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Wako Junyaku Jiho, 87 (1), 5 (2019).
- Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Symmetry, 12, 913 (2020).
製品一覧
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- 掲載されている製品について
- 【試薬】
- 試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
- 製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
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