D/L-アミノ酸(キラルアミノ酸)LC/MS分析用誘導体化試薬

(R)-BiAC法(キラルアミノ酸 LC/MS分析)

アミノ酸は生体内や天然に広く存在する化合物です。アミノ酸には鏡像異性体であるL-アミノ酸及びD-アミノ酸がありますがほとんどがL-アミノ酸として存在しています。近年、微量に存在するD-アミノ酸の、記憶・学習能力への関与1)等の機能性が明らかにされ、L-アミノ酸と分離分析する重要性が高まっています。
R)-BiACは、D/L-アミノ酸(キラルアミノ酸)をプレカラム誘導体化法でLC/MSで分析する際の誘導体化試薬です。(R)-BiACを用いることにより、高分解度・短時間(12分)かつ、専用機器を用いずにキラルアミノ酸分析を行う事ができます。

  1. Hashimoto, A., Oka, T.: Prog. Neurobiol., 52, 325 (1997).

特長

✓専用装置を用いずに、LC/MSでキラルアミノ酸を測定可能!

(R)-BiACを用いプレカラムで誘導体化を行うことで、専用の装置を用いることなくLC/MSでキラルアミノ酸を測定することができます。

✓20種類のD/L-アミノ酸を約12分で一斉分析可能!

多成分のキラルアミノ酸を短時間で一斉分析することが出来ます。

✓キラルアミノ酸を高感度で検出可能!

MSでのイオン化効率が高く、atto molレベルの感度でキラルアミノ酸を検出することが出来ます。

誘導体化手順

試薬の調製

(R)-BiAC試液: (R)-BiAC 5 mg + アセトニトリル 1 mL
ほう酸緩衝液: APDSタグワコー用ほう酸緩衝液 1 + アセトニトリル 1

誘導体化

ヒト尿中キラルアミノ酸の分析例

前処理条件

15種キラルアミノ酸の分析例 (使用カラム: Wakopak® Ultra APDS TAG®)

LC/MS/MS Chromatogram (標準溶液 (D-アミノ酸: 5 μM L-アミノ酸: 50 μM))

LC/MS/MS Chromatogram (ヒト尿サンプル)

成分名 検出イオン (m/z) 成分名 検出イオン (m/z) 成分名 検出イオン (m/z)
Precursor Product Precursor Product Precursor Product
D-Asn 427 295.1 L-Glu 443 295.1 L-Met 445 295.1
L-Asn 428 295.1 D-allo-Thr 414 295.1 D-allo-Ile 426 295.1
D-Gln 441 295.1 L-Thr 415 295.1 L-Ile 427 295.1
L-Gln 442 295.1 D-Ala 384.1 295.1 D-Leu 426 295.1
D-Ser 400 295.1 L-Ala 385.1 295.1 L-Leu 427 295.1
L-Ser 401 295.1 D-Tyr 476 295.1 D-Phe 460.1 295.1
Gly 371 295.1 L-Tyr 477 295.1 L-Phe 461.1 295.1
D-Asp 428.2 295.1 D-Val 412 295.1 D-Trp 499 295.1
L-Asp 429.2 295.1 L-Val 413 295.1 L-Trp 500 295.1
D-Glu 442 295.1 D-Met 444 295.1
[Instrument]

Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500

[HPLC]
Column
Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
Column temperature
40℃
Eluent
A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
Gradient
Time (min.) B conc. (%)
0-3 14-16
3-14.3 16-33
14.3-17 33-45
17-17.1 45-90
17.1-18 90
18-18.1 90-14
18.1-20 14
Flow rate
0.4 mL/min.
[MS]
Ionazation
ESI
Mode
SRM

乳酸菌飲料中キラルアミノ酸の分析例

前処理条件

15種キラルアミノ酸の分析例 (使用カラム: Wakopak® Ultra APDS TAG®)

LC/MS/MS Chromatogram (標準溶液 (D-アミノ酸: 5 μM L-アミノ酸: 50 μM))

LC/MS/MS Chromatogram (乳酸菌飲料サンプル)

成分名 検出イオン (m/z) 成分名 検出イオン (m/z) 成分名 検出イオン (m/z)
Precursor Product Precursor Product Precursor Product
D-Asn 427 295.1 L-Glu 443 295.1 L-Met 445 295.1
L-Asn 428 295.1 D-allo-Thr 414 295.1 D-allo-Ile 426 295.1
D-Gln 441 295.1 L-Thr 415 295.1 L-Ile 427 295.1
L-Gln 442 295.1 D-Ala 384.1 295.1 D-Leu 426 295.1
D-Ser 400 295.1 L-Ala 385.1 295.1 L-Leu 427 295.1
L-Ser 401 295.1 D-Tyr 476 295.1 D-Phe 460.1 295.1
Gly 371 295.1 L-Tyr 477 295.1 L-Phe 461.1 295.1
D-Asp 428.2 295.1 D-Val 412 295.1 D-Trp 499 295.1
L-Asp 429.2 295.1 L-Val 413 295.1 L-Trp 500 295.1
D-Glu 442 295.1 D-Met 444 295.1
[Instrument]

Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500

[HPLC]
Column
Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
Column temperature
40℃
Eluent
A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
Gradient
Time (min.) B conc. (%)
0-3 14-16
3-14.3 16-33
14.3-17 33-45
17-17.1 45-90
17.1-18 90
18-18.1 90-14
18.1-20 14
Flow rate
0.4 mL/min.
[MS]
Ionazation
ESI
Mode
SRM

※本データは分析例です。使用する装置によって、イオンソースのパラメーター等が異なる場合がございます。

参考文献

  1. Harada, M. and Karakawa, S. et al.: J. Chromatogr. A, 1593, 91 (2019).
  2. Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Wako Junyaku Jiho, 87 (1), 5 (2019).
  3. Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Symmetry, 12, 913 (2020).

製品一覧

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誘導体化試薬

HPLCカラム

標準液

※組成情報はこちらをご確認ください。

内部標準液

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    【医薬品原料】
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