ラボアッセイ (TM) GLDH (AAタイプ) LabAssay (TM) GLDH (AA-type)

グルタミン酸デヒドロゲナーゼ (GLDH) は、グルタミン酸とα-ケトグルタル酸の相互変換を触媒する酵素です。GLDHは正常では血清中にわずかにしか存在しませんが、細胞が障害を受けると細胞外に漏出します。特に肝細胞中に多く認められることから、毒性試験などにおいて肝障害のマーカーとして利用されています。また、アセトアミノフェン肝障害誘導ラットにおいてALTよりも検出しやすい肝障害マーカーと報告されています¹⁾。

ラボアッセイ™ GLDH (AAタイプ) は、検体中のGLDHを測定するための自動分析装置専用試薬です。短時間で検体中のGLDHを測定することが可能です。

原理

試料中のGLDHにより、アンモニアとα-ケトグルタル酸は、グルタミン酸に変換されます。このときNADHは、β-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド酸化型 (NAD) に酸化され、340 nmの吸光度が減少します。この吸光度の減少を測定することによりGLDHの値を求めます。

同時再現性試験

本製品で各2濃度のヒト、マウス、ラット、イヌ、ウサギの血清/血漿 (EDTA) について8重測定を実施し、精度を確認した。

[結果]
ヒト検体のCV(%)は、0.3-2.8%、マウス検体のCV(%)は、0.6-6.8%、ラット検体のCV(%)は、0.6-4.7%、イヌ検体のCV(%)は、0.6-4.1%、ウサギ検体のCV(%)は、0.3-1.9%であり、良好であった。

日差再現性試験

本製品で各2濃度のヒト、マウス、ラット、イヌ、ウサギの血清/血漿 (EDTA) を用いて、4日間測定を実施し、精度を確認した。

[結果]
ヒト検体のCV(%)は、2.5-6.6%、マウス検体のCV(%)は、2.0-3.9%、ラット検体のCV(%)は、2.2-3.1%、イヌ検体のCV(%)は、1.9-4.1%、ウサギ検体のCV(%)は、2.2-6.6%であり、良好であった。

希釈直線性試験

生理食塩水を用いて、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ウサギの血清/血漿 (EDTA) およびサルの血清を倍々希釈後、2重測定を実施し、直線性を確認した。

[結果]
いずれも測定範囲内で良好な直線性を示した。

添加回収試験

ヒト、マウス、ラット、イヌ、ウサギの血清/血漿 (EDTA) およびサルの血清に4濃度の標準品を添加し、2重測定を実施した。

[結果]
いずれも良好な回収率であった。

従来品との相関性

ラボアッセイ™ GLDH (AAタイプ) (以下、本製品)、およびラボアッセイ™ GLDH-ラット (Aタイプ) (コードNo. 291-93401、以下 従来品)を用いて、ラット血清・血漿中のGLDHを測定し、その相関を確認した。

[結果]
本製品と従来品の測定値には高い相関が確認できた。

他社製品との相関性

ラボアッセイ™ GLDH (AAタイプ) (以下、本製品)、およびA社もしくはB社のGLDH測定試薬を用いて、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ウサギの血清/血漿 (EDTA) 中GLDHを測定し、その測定値の相関を確認した。測定方法は、各キットの測定操作法に準拠した。

[結果]
本製品は他社製品と高い相関を示した。

他肝障害マーカー (ALT,AST) との相関性

薬物性肝障害において、GLDHはALTと強く相関することが示されている²⁾。
マウス、ラットに薬剤を投与してから数日後に血漿を採取し、ALT,AST,GLDHを測定した (同一検体を測定しているが、ALT,ASTは新鮮検体、GLDHは凍結検体の測定値である)。測定範囲を超える検体に対しては10倍希釈にて測定した。

[結果]
GLDHはALT、AST間で高い相関が見られた。
※GLDHは凍結検体の測定値のため、参考値としてご理解ください

検体測定例

参考文献

1. Robert J. H. et al.:, Biomarkers., 5, 22 (2017)
   A longitudinal assessment of miR-122 and GLDH as biomarkers of drug-induced liver injury in the rat
2. Church, R. J. et al.:, Hepatology., 2, 69 (2015)
   Candidate biomarkers for the diagnosis and prognosis of drug-induced liver injury: An international collaborative effort.