レビス® Human TNF-α ELISA Kit Human TNF-α ELISA Kit

TNF-αは、マウスに移植した腫瘍に対して出血性壊死を誘導する因子として同定された157アミノ酸の炎症性サイトカインです。活性型マクロファージ、B 細胞、T 細胞、繊維芽細胞など種々の細胞で産生された後、 生体内の細胞に広く存在している TNF 受容体である TNFR1 や免疫系細胞に存在する TNFR2 に結合し、アポトーシスの誘導や抗体産生の亢進などを行うことにより、感染防御や抗腫瘍作用などに働くことが知られています。TNF-α は様々な疾患との関連性が報告されており、関節リウマチ、炎症の他、糖尿病・高脂血症、 腎症、敗血症、骨粗鬆症などの分野で注目されています。

本製品は、ヒト TNF-α を定量的に測定するためのサンドイッチ酵素免疫測定法試薬で、ヒト血清(血漿)中の TNF-α を特異的かつ高感度に測定することができます。

• 
  

• 特長

  • カルタヘナ法非該当(バキュロウイルス不含)
  • 短時間(総反応時間3時間50分)
  • 高感度測定(2.05 pg/mL～)
  • 微量検体(～100 μL)

• 製品情報

  検体

  ・ヒト血清
  ・ヒト血漿(EDTA/ヘパリン)
  ・培養上清

  標準曲線範囲

  　2.05～500 pg/mL

• 操作法

  抗体固相化96ウェルプレート 　↓ 洗浄 4 回 　↓ 希釈検体または標準溶液 　↓ 攪拌、室温、2 時間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ ビオチン結合抗TNF-α抗体 　↓ 攪拌、室温、1 時間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ ペルオキシダーゼ・アビジン結合物 　↓ 攪拌、室温、30 分間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ 発色液(TMB) 　↓ 攪拌、室温、20 分間静置反応 　↓ 反応停止液(1M H2SO4) 　↓ 攪拌 　↓ 吸光度測定(主波長450 nm、副波長620 nm)	100 µL 100 µL 100 µL 100 µL 100 µL
  室温：20～25 ℃

• 標準曲線(例)

  

• 精度試験(アッセイ内変動)

  正常血清に異なる濃度のTNF-αを添加した2検体を5重測定し精度を確認した。

  n/ID	Sample1(pg/mL)	Sample2(pg/mL)
  1	210	17.8
  2	206	17.7
  3	205	18.1
  4	209	18.3
  5	212	17.5
  mean	208	17.9
  SD	2.9	0.32
  CV(%)	1.4	1.8

• 再現性試験(アッセイ間変動)

  正常血清に異なる濃度のTNF-αを添加した3検体を4日間3重測定し精度を確認した。

  Day/ID	Sample1(pg/mL)	Sample2(pg/mL)	Sample3(pg/mL)
  0日目	135	52.1	14.6
  1日目	140	45.8	15.1
  2日目	122	53.6	15.3
  3日目	132	55.0	15.4
  mean	132	51.6	15.1
  SD	7.6	4.06	0.36
  CV(%)	5.7	7.9	2.4

添加回収試験

正常血清または血漿検体に異なる 3 濃度のTNF-α を添加し測定した。

• 血清検体

  添加量(pg/mL)	実測値(pg/mL)	回収量(pg/mL)	回収率(％)
  0	0.458	-	-
  6.25	6.62	6.16	98.6
  25.0	25.8	25.3	101
  100	106	106	106
  平均　102

• 血漿(ヘパリン)検体

  添加量(pg/mL)	実測値(pg/mL)	回収量(pg/mL)	回収率(％)
  0	0.668	-	-
  6.25	6.57	5.90	94.4
  25.0	25.6	24.9	99.6
  100	99.4	98.7	98.7
  平均　97.6

検体測定(例)

ヒト正常検体(血清、EDTA血漿、ヘパリン血漿)測定結果

• 血清検体No.	LBIS	他社
  1	2.15	N.D.
  2	19.5	N.D.
  3	(1.78)	N.D.
  4	N.D.	N.D.
  5	3.26	N.D.
  6	N.D.	N.D.
  7	(1.75)	N.D.
  8	N.D.	N.D.
  9	N.D.	N.D.
  10	(1.54)	N.D.

  (単位：pg/mL)

• 検体条件	LBIS	他社A
  血清　10検体中	6/10 検出	0/10 検出
  EDTA血漿　10検体中	6/10 検出	1/10 検出
  ヘパリン血漿　10検体中	7/10 検出	0/10 検出

  
  

  ※ヘパリンを推奨します。

  検出感度が高いため、数 pg/mLのTNF-αを定量検出できた。