レビス® Human VEGF ELISA Kit LBIS Human VEGF ELISA Kit

VEGFファミリーは血管新生において重要な役割を担うサイトカインで、異なる遺伝子にコードされるVEGF-A,VEGF-B,VEGF-C,VEGF-D,VEGF-E, PLGF -1及びPLGF-2 の7種類が知られています。
なかでも、VEGF-A は最も強力な作用を示し、選択的スプライシングにより121,165,189アミノ酸タイプのサブタイプが存在することが知られています。
VEGF-A₁₆₅はサブタイプの中で、最も多く存在し、腫瘍血管を誘導する効率も高いことが知られており、種々のがんにおいて、予後の悪化と強く関係することが示されています。
また、関節リウマチ、動脈硬化、網膜症、POEMS症候群などの疾患との相関も報告されています。

• 
  

• 特長

  • カルタヘナ法非該当 (バキュロウイルス不含)
  • 正常血清／血漿検体でも測定可能
  • 短時間 (総反応時間4時間50分)
  • 微量検体 (～100 μL)
  • 高感度測定 (1.10 pg/mL～)

• 製品情報

  検体

  ・ヒト血清
  ・ヒト血漿 (ヘパリン/EDTA)
  ・培養上清

  標準曲線範囲

  　1.10～800 pg/mL

• 操作法

  抗体固相化96ウェルプレート 　↓ 洗浄 4 回 　↓ 希釈検体または標準溶液 　↓ 攪拌、室温、2 時間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ ビオチン結合抗VEGF抗体 　↓ 攪拌、室温、2 時間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ ペルオキシダーゼ・アビジン結合物 　↓ 攪拌、室温、30 分間静置反応 　↓ 洗浄 4 回 　↓ 発色液(TMB) 　↓ 攪拌、室温、20 分間静置反応 　↓ 反応停止液 (1M H2SO4) 　↓ 攪拌 　↓ 吸光度測定 (主波長450 nm、副波長620 nm)	100 µL 100 µL 100 µL 100 µL 100 µL
  室温：20～25 ℃

• 標準曲線(例)

  

  プレートリーダーはInfinite f200 (Tecan) を使用
  　演算処理は3次多項式を使用

  精度

  • アッセイ内変動試験 (5重測定、2検体)　　　　 　 C.V.値は15%未満
  • アッセイ間変動試験 (3重測定、3検体、4日間)　　C.V.値は15%未満

• 精度試験(アッセイ内変動)

  2濃度の血清検体を5重測定し精度を確認した。

  n/ID	Sample1(pg/mL)	Sample2(pg/mL)
  1	29.7	37.8
  2	28.3	36.5
  3	27.7	35.0
  4	29.3	35.4
  5	28.8	35.4
  mean	28.8	36.0
  SD	0.79	1.1
  CV(%)	2.8	3.2

• 再現性試験(アッセイ間変動)

  3濃度の血清検体を4日間3重測定し精度を確認した。

  Day/ID	Sample1(pg/mL)	Sample2(pg/mL)	Sample3(pg/mL)
  0日目	279	86.1	11.9
  1日目	271	84.5	12.5
  2日目	268	88.5	11.2
  3日目	269	88.1	11.5
  mean	272	86.8	11.8
  SD	5.0	1.9	0.56
  CV(%)	1.8	2.1	4.8

添加回収試験

3濃度の標準品を血清検体および血漿検体に添加し、添加回収試験を行い回収率を確認した。

• 血清検体

  添加量(pg/mL)	実測値(pg/mL)	回収量(pg/mL)	回収率(％)
  0	50.6	-	-
  89.0	145	94.4	106
  189	237	186	98.4
  388	456	405	104

• 血漿検体

  添加量(pg/mL)	実測値(pg/mL)	回収量(pg/mL)	回収率(％)
  0	42.1	-	-
  97.5	134	91.9	94.3
  197	240	198	100
  396	420	378	95.5

希釈直線性試験

キット緩衝液を用いて倍々希釈した2濃度の血清検体および血漿検体を測定し、直線性を確認した。

• 血清

  

• 血漿

  

検体測定(例)

ヒト正常検体(血清、EDTA血漿、ヘパリン血漿)測定結果

ヒト正常血液検体(血清、EDTA血漿、ヘパリン血漿：同一ドナーではない)を、各々10検体ずつ測定に供した。

【実施例の結果】
・血清(10/10検出)　4.8～28.1 pg/mL 　　　　　　　・EDTA血漿(10/10検出)　13.0～22.1 pg/mL 　　　　　　　・ヘパリン血漿(8/10検出)　ND、1.8～23.1 pg/mL

　検出感度が高いため、数 pg/mLのVEGFを定量検出できた。