COA-Cl COA-Cl

COA-Cl（コアクロル）は、血管新生促進作用を示す低分子化合物です。神経保護・栄養作用も示します。水溶性の低分子化合物であり、VEGFやNGFに代わり再生医療における血管や神経の構築に用いることができる可能性があります。また、Xeno-free培地の添加剤として有用である可能性があります。

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• C₁₁H₁₄ClN₅O₂=283.71
  CAS RN^® 1253579-96-2

血管内皮細胞と線維芽細胞の共培養系での使用例：血管新生促進作用

10日間培養後に形成される管腔面積が増加した。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

ニワトリ漿尿膜（CAM）とウサギ角膜を用いた血管新生促進作用確認例

（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

正常ヒト線維芽細胞におけるVEGF産生分泌促進作用確認例

±COA-Cｌ（100mmol/L）の培地に交換し、24時間後、±低酸素（1%）に24時間おき、細胞中、培地中のVEGFをELISAで定量した。
COA-Clを含む培地で培養した場合、より高いVEGF産生・分泌が確認された。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

神経モデル細胞（PC12 ）における突起伸長（96時間後）：神経栄養作用

（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

神経モデル細胞（PC12 ）におけるドパミン濃度の上昇

培養3日後の培地中ドパミン濃度をHPLCで測定した。
ドパミン濃度の上昇が確認された。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

ラットグリオーマ細胞（C6）の培養例：細胞保護作用

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• (A) DｰMEM
  (B) DｰMEM＋血清（ウマ15%＋ウシ2.5%）
  (C) DｰMEM＋COA-Cl（100μmol/L）

ラットグリオーマ細胞（C6）を24ウェルプレートに播種し、翌日、（A）、（B）、（C）に置換し、16日間培養した（培地交換なし）。
（A）、（B）では、12日目に細胞が死滅したが、（C）では12日目も変化なく、さらに14日目に培地を（B）に交換すると、増殖を始めた。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

神経モデル細胞（PC12）の培養例：代替血清としての可能性

神経モデル細胞（PC12）を播種し、翌日、DｰMEM±血清（ウマ10%＋ウシ5%）に交換してCOA-Cl（100μmol/L）を添加、24時間後に細胞数を計測した。
COA-Clを添加した場合、細胞数の増加が確認できた。また、血清を含まない培地においても、COA-Clを添加した培地では、血清を添加した培地と同様の細胞増殖を示した。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

神経モデル細胞（PC12）の培養例：酸化ストレスからの保護作用

神経モデル細胞（PC12）を播種し、翌日培地交換してCOA-Cl（100μmol/L）、過酸化水素（200μmol/L）を添加、24時間後にストレスに応じて放出されるLDH、アポトーシス関連タンパク質、活性酸素を測定した。
COA-Clを添加した場合は、LDH、アポトーシス関連タンパク質、活性酸素の放出量が減少した。
（データご提供：香川大学医学部　塚本郁子先生）

1. Tsukamoto, I., Sakakibara, N., Maruyama, T., Igarashi, J., Kosaka, H., Kubota, Y., Tokuda, M., Ashino, H., Hattori, K., Tanaka, S., Kawata, M. and Konishi, R. : Biochem. Biophys. Res. Commun. 399, 699 (2010).
   血管内皮細胞（HUVEC）におけるCOA-Clの作用点は、VEGF受容体よりも下流で、MAP kinase cascadeのMEK、ERK1/2を活性化させる。
2. Igarashi, J., Hashimoto, T., Kubota, Y., Shoji, K., Maruyama, T., Sakakibara, N., Takuwa, Y., Ujihara, Y., Katanosaka, Y., Mohri, S., Naruse, K., Yamashita, T., Okamoto, R., Hirano, K., Kosaka, H., Takata, M., Konishi, R. and Tsukamoto, I. : Pharmacol. Res. Perspect., 2(5), e00068 (2014).
   S1P1受容体やカルシウムイオンの関与。
3. Igarashi, J., Okamoto, R., Yamashita, T., Hashimoto, T., Karita, S., Nakai, K., Kubota, Y., Takata, M., Yamaguchi, F., Tokuda, M., Sakakibara, N., Tsukamoto, I., Konishi, R. and Hirano, K. : Physiol. Rep., 4, e12742 (2016).
   VEGFの遺伝子レベル（mRNA）の上昇を確認。HIF1αではなく転写補助因子PGC1αが寄与している。
4. Okabe, N., Nakamura, E., Himi, N., Narita, K., Tsukamoto, I., Maruyama, T., Sakakibara, N., Nakamura, T., Itano, T. and Miyamoto, O. : Brain Res., 1506, 115 (2013).
   ラット脳梗塞モデルにおいて、損傷体積を減少させ、clinical scoreを改善する。
5. Kishimoto, Y., Tsukamoto, I., Nishigawa, A., Nishimoto, A., Kirino, Y., Kato, Y., Konishi, R., Maruyama, T. and Sakakibara, N. : Data Brief, 20, 1877 (2018).
   アルツハイマーモデルマウスの記憶学習を改善する。
6. Jamal, M., Tsukamoto, I., Takata, M., Ito, A., Tanaka, N., Miki, T., Takakura, A., Ameno, K., Kubota, Y., Konishi, R. and Kinoshita, H. : Brain Res., 1706, 68 (2019).
   神経モデル細胞（PC12）、マウス脳内におけるドパミン濃度を上昇する。
7. Lu, F., Nakamura, T., Okabe, N., Himi, N., Nakamura-Maruyama, E., Shiromoto, T., Narita, K., Tsukamoto, I., Xi, G., Keep, R. F. and Miyamoto, O. : J. Stroke Cerebrovasc. Dis., 25, 2637 (2016).
   ラット脳出血モデルにおける症状の改善。
8. Nishikido, T., Oyama, J., Shiraki, A., Tsukamoto, I., Igarashi, J. and Node, K. : Sci. Rep., 9, 2533 (2019).
   マウス心筋梗塞モデルにおける症状の改善。
9. Kawami, M., Deguchi, J., Yumoto, R., Sakakibara, N., Tsukamoto, I., Konishi, R. and Takano, M. : Drug Metab. Pharmacokinet., 32, 224 (2017).
   TGFβ誘発性の肺の線維化抑制。
10. Nakai, K., Karita, S., Igarashi, J., Tsukamoto, I., Hirano, K. and Kubota, Y. : J. Dermatol. Sci., 94, 205 (2019).
    TGFβ誘発性の皮膚の線維化抑制。