ピルズA PyrzA

PyrzAは、低酸素誘導因子(HIF-1α)を活性化させる化合物です。通常の酸素状態下では、HIF-1αはプロリン水酸化酵素(PHD)によってHIF-1αのプロリン残基が水酸化され、HIF-1αの分解へとつながります。そこで、本製品では、HIF-1αとプロリン残基部分と構造が酷似していることで、HIF-1αとの競合阻害を発生させ、HIF-1αを活性化させます。テトラクリエイト社は、新規化合物及びその用途について特許^※1を取得しております。

※1：特許第6904528号

特長

• 低酸素活性化化合物
• PHD阻害化合物

イムノブロッティング法を用いたHIF-αの濃度依存的活性化確認

HIF-αはHIF-1αとHIF-2αの2つのアイソフォームにて構成されている。これら2つのタンパク質の安定化を確認するため、SK-N-BE(2)c、HeLA、およびHeq3B細胞株を用いてイムノブロッティング分析を行った。

【実験方法】
5.0×10⁵個となるように細胞を12well plateの各ウェルに播種し、16時間インキュベート。インキュベート後、各wellに最大濃度100 μMのPyrzAまたはFG4592とネガティブコントロールとしてDMSOをそれぞれ加え、24時間後、イムノブロッティング法を用いてHIF-1αの安定化を確認した。

【結果】
PyrzA処理がFG4592と同様に、 SK-N-BE(2)c、HeLa、およびHep3B細胞のHIF-1αの容量依存的な安定化につながることを示した。

PyrzAによるプロリル水酸化酵素阻害の確認

【実験方法】
5.0×10⁵個となるようにSK-N-BE(2)cまたはHeLa細胞を播種し 10 μMのMG132を加え、PyrzAまたはFG4592を色々な濃度(10、30および100 μM)で24時間処理を行い、ネガティブコントロールとしてDMSOを用いた。同時に、細胞をPyrzA(100 μM)、FG4592 (100 μM)、またはMG132 (100 μM)で24時間独立処理を行った。

【結果】
Pro402とPro564を含むHIF-1αの２つのヒドロキシル化部位が、ヒドロキシル化特異的抗体で検出された。SK-N-BE(2)cおよびHeLa細胞では、PyrzAまたはFG4592処理のみがHIF-1αタンパク質を安定化した。特に、PyrzAは、FG4592の活性と比較した場合、HIF-1αでのPro402およびPro564のヒドロキシル化を阻害した。

ドッキングシミュレーションによるPyrzAの結合部位予測

【結果】
PyrzAの五員環構造はHIF-1αのプロリン残基周辺のアミノ酸と良い重なりを示すことから、HIF-αの被水酸化部位と拮抗阻害することが予測される。

参考文献

1. ACS Pharm. Transl. Sci. ,2022,5,362-372.doi:10.1021/acsptsci.2c00002

PyrzA-50

• PyrzAの50倍活性を持つ化合物
  化学式：C₂₉H₃₈N₄O₄
  分子量：506.6
  物理的状態（20℃）：クリーム色固体

• 

イムノブロッティング法を用いたPyrzAとPyrzA-50のHIF活性化の比較

【実験方法】
5×10⁵個となるようにHep3B細胞を12 well plateの各ウェルに播種し、PyrzAまたはFG4592を 1 10, 50, 100 μＭの希釈系列それぞれ加え、24時間後イムノブロッティング法を用いてHIF-1αの安定化を確認した。なお陰性対象としてDMSO処理を示している。

【結果】
PyrzA-50は、PyrzAよりも少ない濃度で、HIF-1αおよび2αを安定させた。