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「下水中の新型コロナウイルス遺伝子検出マニュアル (暫定版)」対応

新型コロナウイルス検出試薬 (下水サンプル)

新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) の流行に伴い、様々な感染症対策が行われています。新型コロナウイルスの主な伝播経路はヒト-ヒト間での飛沫感染や接触感染ですが、ヒト糞便からもウイルス遺伝子は検出されます。そのため、下水中の新型コロナウイルス遺伝子を測定することにより、処理区域における流行状況を映し出すことができると考えられています。日本水環境学会COVID-19タスクフォースは、下水中の新型コロナウイルスの検査手法と手順について、「下水中の新型コロナウイルス遺伝子検出マニュアル(暫定版)」を2020年12月15日に公表しました。本マニュアルでは、測定法選択の際に参照できるよう、これまでの研究成果に基づいた現時点で推奨できる様々な測定法を記載しています1)。当社では、本マニュアルに記載のある各種試薬や機器等を取り揃えております。

本ページでは、「下水中の新型コロナウイルス遺伝子検出マニュアル (暫定版)」に対応する試薬を各工程のタイトル別に記載しております※1,2。

  • 1 当社試薬の実用試験は行っておりません。
  • 2 他の規格もご用意しております。
参考
  1. (公社)日本水環境学会COVID-19タスクフォース「下水中の新型コロナウイルス遺伝子検出マニュアル(暫定版)」より
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2.1 試料採取

測定法記載名 製品コード 品名 規格 容量
チオ硫酸ナトリウム 193-03582 チオ硫酸ナトリウム五水和物 試薬特級 25 g
195-03581 100 g
197-03585 500 g
次亜塩素酸ナトリウム 197-02206 次亜塩素酸ナトリウム溶液 化学用 500 mL
195-02207 20 kg

3.1.1 プロセスコントロール

(1) マウス肝炎ウイルス
(2) φ6ウイルス

測定法記載名 製品コード 品名 販売元 容量
TE バッファー 314-90021 TE (pH 8.0) 株式会社ニッポンジーン 100 mL
310-90023 100 mL x 6
316-90025 500 mL
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(3)Fファージ

測定法記載名 製品コード 品名 規格/販売元 容量
グリセロール 070-04941 グリセリン 分子生物学用 100 mL
072-04945 500 mL
Trypton 558-35905 トリプトン USP Solabia Biokar Diagnostics 500 g
556-35901 5 kg
D(+)-Glucose 032-23981 CultureSure® D(+)-グルコース, 動物由来物フリー 細胞培養用 100 g
NaCl 192-13925 塩化ナトリウム 分子生物学用 500 g
190-13921 1 kg
CaCl2・2H2O 036-19731 塩化カルシウム二水和物 分子生物学用 100 g
038-19735 500 g
MgSO4・7H2O 131-15275 硫酸マグネシウム七水和物 分子生物学用 500 g
寒天 016-08722 寒天, 粉末 細菌培地用 25 g
018-08721 100 g
010-08725 500 g
カナマイシン硫酸塩 117-00341 カナマイシン硫酸塩 生化学用 1 g
113-00343 5 g
115-00342 25 g
111-00344 100 g
117-00961 カナマイシン硫酸塩溶液 (50 mg/mL) 細胞培養用 20 mL
ナリジクス酸ナトリウム塩 147-09641 ナリジクス酸 生化学用 5 g
145-09642 25 g
リン酸緩衝液 161-12191 りん酸緩衝剤粉末 (1/15 mol/L, pH 7.0) 生化学用 1 L用 x 20
滅菌水 196-15645 滅菌水、エンドトキシンフリー 細胞培養用 500 mL

(4)トウガラシ微斑ウイルス

測定法記載名 製品コード 品名 販売元 容量
TE バッファー 314-90021 TE (pH 8.0) 株式会社ニッポンジーン 100 mL
310-90023 100 mL x 6
316-90025 500 mL
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3.1.2 濃縮手法

(1) ポリエチレングリコール沈殿法

測定法記載名 製品コード 品名 規格/販売元 容量
PEG 169-22945 ポリエチレングリコール 6,000 分子生物学用 500 g
167-22941 1 kg
塩化ナトリウム 192-13925 塩化ナトリウム 分子生物学用 500 g
190-13921 1 kg
遠心チューブ 630-28963 スーパークオリティ遠沈管 50 mL 住友ベークライト株式会社 150 本
リン酸緩衝液 161-12191 りん酸緩衝剤粉末 (1/15 mol/L, pH 7.0) 生化学用 1 L用 x 20
1.5 mLチューブ 635-32781 スクリューキャップ マイクロチューブ(アタッチ, 自立) 1.5 mL AGCテクノグラス株式会社 500 個

(2) 陰電荷膜破砕型濃縮法

測定法記載名 製品コード 品名 規格/販売元 容量
混合セルロース膜 365-04461 GN-4メトリセルメンブレン・ディスクフィルター 0.8μm, 47mm Pall Corporation 100 枚
MgCl2・6H2O 131-15052 塩化マグネシウム六水和物 分子生物学用 25 g
133-15051 100 g
135-15055 500 g
超純水 196-15645 滅菌水、エンドトキシンフリー 細胞培養用 500 mL
Na4P2O7・10H2O 195-03025 二りん酸ナトリウム十水和物 試薬特級 500 g
C10H13N2O8Na3・3H2O 340-01871 エチレンジアミン-N,N,N',N'-四酢酸三ナトリウム塩三水和物 株式会社同仁化学研究所 50 g
342-01875 500 g
Tween 80 161-21621 ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート 分子生物学用 50 mL
163-21625 500 mL
塩酸 081-08671 塩酸 プロテオミクス用 100 mL
083-08675 500 mL
遠心式フィルターユニット 363-10251 マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン 30K Pall Corporation 24本
369-10253 100 個
ディスポーサブルフィルターユニット 368-00311 スーポアアクロデスク・シリンジフィルター 0.45 µm, 25 mm (滅菌済) Pall Corporation 50 個
プラスチックピペット 639-28271 10 mL ピペット 住友ベークライト株式会社 200 本
633-28291 25 mL ピペット 200 本
マイクロチューブ 635-32781 スクリューキャップ マイクロチューブ (アタッチ, 自立) 1.5 mL AGCテクノグラス株式会社 500 個

(3) 限外ろ過膜法

測定法記載名 製品コード 品名 規格/販売元 容量
アスピレーター 649-04031 アスピレーターハンドピースピペットチップ対応アダプターセット Corning International, Inc. 1 セット
Centricon Plus-70 100 kDa 367-06121 ジャンボセップ・遠心ろ過デバイス スターターキット オメガ100K, 透明 Pall Corporation 4 個
362-06671 12 個
360-10261 マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過 デバイス オメガメンブレン 100K 24 本
366-10263 100 個
親水性PTFE膜 (孔径0.2 µm) 635-46691 シリンジフィルター、親水性PTFE、直径13 mm、孔径0.22 μm テクノラボエスシィ株式会社 100 個
635-46711 シリンジフィルター、親水性PTFE、直径25 mm、孔径0.22 μm 100 個
369-10611 ディスクメンブレン、直径47mm、孔径0.2 μm Pall Corporation 100 個

3.2.1 RNA 抽出

(1) 核酸抽出キットQIAamp Viral RNA Mini Kit を用いる方法

測定法記載名 製品コード 品名 規格 容量
エタノール 052-07221 エタノール (99.5) 分子生物学用 100 mL
054-07225 500 mL

(2) AGPC (acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction) 法

測定法記載名 製品コード 品名 製造元 容量
TRIzol 315-02504 アイソジェン 株式会社ニッポンジーン 10 mL
317-02503 50 mL
311-02501 100 mL
319-90211 200 mL
TRIzol + RNeasy Mini Kit 314-07513 アイソジェン スピンカラム付き 株式会社ニッポンジーン 10 回用
318-07511 50 回用
TRIzol® LS 317-02623 アイソジェン-LS 株式会社ニッポンジーン 10 mL
311-02621 100 mL

3.2.2 RT-qPCR による検出

測定法記載名 製品コード 品名 製造元 容量
逆転写キット 319-08881 ジーンエース cDNA合成キット 株式会社ニッポンジーン 50 回用
リアルタイムPCR マスターミックス 317-08821 ジーンエース Probe qPCR ミックスⅡ 株式会社ニッポンジーン 50 反応用
313-08823 200 反応用
96 well リアルタイムPCR 反応プレート 639-32321 96ウエル PCR用プレート AGCテクノグラス株式会社 100 個
RNase free water 316-90101 脱イオン蒸留水 株式会社ニッポンジーン 100 mL
312-90103 100 mL x 6
318-90105 500 mL

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2.1 試料採取

3.1.1 プロセスコントロール
(1) マウス肝炎ウイルス

3.1.1 プロセスコントロール
(3) Fファージ

3.1.1 プロセスコントロール
(4)トウガラシ微斑ウイルス

3.1.2 濃縮手法
(1) ポリエチレングリコール沈殿法

3.1.2 濃縮手法
(2) 陰電荷膜破砕型濃縮法

3.1.2 濃縮手法
(3) 限外ろ過膜法

3.2.1 RNA 抽出
(1) 核酸抽出キットQIAamp Viral RNA Mini Kit を用いる方法

3.2.1 RNA 抽出
(2) AGPC (acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction) 法

3.2.2 RT-qPCR による検出

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