ウラシルDNAグリコシラーゼ (UNG)
Uracil-DNA Glycosylase (UNG)
- 製造元 :
- (株)ニッポンジーン
- 保存条件 :
- 冷凍 (ドライアイス輸送)
- 構造式
- ラベル
- 荷姿
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比較
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製品コード
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容量
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価格
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在庫
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100ng
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ドキュメント
- スペクトルデータ
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- 検査成績書
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- 校正証明書
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製品概要
本品は、E. coli 由来のウラシルDNA グリコシラーゼ（UNG）です。ウラシルを含むDNA のデオキシリボースとウラシル残基の間のN-グリコシド結合を加水分解し、脱ピリミジン部位をつくります。
UNG は、PCR のキャリーオーバー対策に利用できます。PCR を行う際、UNG 処理を行うことで、前の反応から持ち込まれたPCR 産物（ウラシルを含む）を除くことができます。
特長
・ UNGを添加してPCRキャリーオーバー防止！
使用例
反応液組成（例）
| UNG (1 ng /μL) | 0.5μl | 0.25μl | |
| 2X GeneAce Probe qPCR Mix II | 25μl | 12.5μl | (final conc. 1X) |
| 25μM Forward Primer | 1μl | 0.5μl | |
| 25μM Reverse Primer | 1μl | 0.5μl | |
| 10μM TaqMan® Probe | 1μl | 0.5μl | |
| Template DNA | 5μl | 2.5μl | |
| ddWater | up to 50μl | up to 25μl |
推奨PCRサイクル条件
| 40°C | 2分 | 1サイクル | UNG 処理 |
| 95°C | 10分 | 1サイクル | UNG 不活化, PCR 酵素活性化 |
| 95°C | 30秒 | 45サイクル | |
| 60°C | 1分 |
アプリケーションデータ
実験例1 UNGの活性確認
各濃度の UNG と dUTPを取り込んだ 1μg のPCR産物（0.5 kb）を 37℃で30分間反応させ、UNG 活性によりDNA が分解されているかアガロースゲル電気泳動で確認した。
結果 ウラシルを含むPCR産物はUNGにより分解された。
実験例2 PCR キャリーオーバーコンタミネーション防止効果の検証
ウラシルを含む PCR 産物を鋳型とし、リアルタイム PCR を行った。 リアルタイム PCR は、UNG の添加量（0μL, 0.1μL, 0.25μL, 0.5μL/反応）を変えて UNG 処理を行ってから、PCR 酵素活性化処理（UNG 不活化）と PCRを行った。
| PCR condition： | 40°C 2分→95°C 10分→（95°C 30秒→59°C 1分） x 45サイクル |
| Target： | ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp） |
| PCR volume： | 25 μl |
| 試薬： | GeneAce Probe qPCR Mix II |
| 装置： | LightCycler® 96（Roche社） |
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- 結果
UNG 添加なしの場合、ウラシルを含む鋳型で増幅が認められたが、UNG 添加ありの場合には増幅は認められず、ウラシルを含むDNAからの増幅を抑制できた。
実験例3 UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響
プラスミドDNA（ウラシルを含まない）を鋳型としたリアルタイムPCRを行い、UNGの添加による増幅効率の比較を行った。
| Target： | ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp） |
| PCR volume： | 25 μl |
| 試薬： | GeneAce Probe qPCR Mix II |
| 装置： | Applied Biosystemns 7500 Fast System |
| UNG添加量： | 0.25 ng/反応 |
結果
増幅曲線および検量線の結果から、UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響は認められなかった。
FAQ
- UNGの添加量を増やしてもよいですか？
- PCR反応液中へ本酵素の持ち込み量が多くなりすぎるとPCR反応を阻害することがあります。 酵素の使用量は、50 μL の反応液中、0.1～1 μL を目安にしてください。
- 1 step RT-PCR に使用できますか？
- 本酵素は55℃でも部分的に活性を有するため、1 step RT-PCR には使用しないでください。
概要・使用例
| 概要 | Uracil-DNA Glycosylase （UNGまたはUDG）は、ウラシルを含む一本鎖および二本鎖DNAを加水分解し、ウラシルを遊離させる酵素です。RNAに対しては作用しません。UNG処理によりウラシルが除去された脱塩基DNA鎖は熱により分解されやすく、PCRの鋳型にならないため、PCRキャリーオーバー対策によく使用されます。 |
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物性情報
「物性情報」は参考情報でございます。規格値を除き、この製品の性能を保証するものではございません。
本製品の品質及び性能については、本品の製品規格書をご確認ください。
なお目的のご研究に対しましては、予備検討を行う事をお勧めします。
製造元情報
別名一覧
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- 掲載されている製品について
- 【試薬】
- 試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
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- 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
- 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。
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