MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2は細胞培養上清、血清、血漿などのサンプルからエクソソームをはじめとする細胞外小胞 (EV) を高純度かつ簡便に単離・精製できるキットです。EVの膜表面に存在するホスファチジルセリン (PS) とカルシウム依存的に結合するTim4タンパク質を応用することで、インタクトかつ高純度なEVの単離・精製を実現しました。本製品の原理であるPSアフィニティー法は、2024年に公開されたEV研究の国際標準ガイドラインであるMISEV2023でもEVの分離手法の1つとして紹介されています¹⁾。

特長

• 新規アフィニティー法 (PSアフィニティー法) によりEVを単離・精製
• 従来の超遠心分離法よりも高純度なEVを高い収量で回収
• ダメージの少ないインタクトなEVが取得でき、様々なアプリケーションに利用可能
• 磁気ビーズによる簡便操作で、多検体処理と高い実験再現性を実現

サンプル

• 細胞培養上清
• 血清
• 血漿 (ヘパリン、EDTA、くえん酸)
• 尿
• 糞便
• 唾液　など

ヒト血漿200 μLから各手法でEVを単離し、LC/MS Orbitrap Fusion Lumos with FAIMS Pro (DIA、120分) を用いてプロテオミクス解析を行った。EVの純度は同定した全タンパク質の総量における、EVマーカータンパク質の総量の割合 (EES: EV Enrichment Score、以下式参照) で比較した。

[結果]
本製品は、他の手法と比較してタンパク質の同定数が多かった。
またEESも高く、高純度なEVが単離できていることが示唆された。

骨髄由来MSC (BMMSC) の細胞培養上清およびヒト血清、ヘパリン血漿から本製品 (PS) もしくはサイズ排除クロマトグラフィー (SEC) でEVを単離・精製した。EVの回収量はCD9-もしくはCD63-Capture ヒトエクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP)で測定した。

[結果]
本製品はSECよりも高いEV回収率を示した。

各種ヒト血液サンプルから本製品でEVを単離・精製した。EVの回収量はPS Capture™ エクソソームELISAキット (ストレプトアビジンHRP) で測定した。なお溶出バッファーは2種類の濃度 (1xおよび2x) で検討した。

[結果]
本製品によってヒト血清、血漿サンプルから高効率でEVを回収できた。
特に血漿サンプルは高濃度 (2x) の溶出バッファーを使用することで回収率が向上した。

HEK293を10% FBS含有D-MEM培地で増殖後、サプリメントを添加したEV産生培地 EV-Up™ MSC EV産生用基礎培地, AFで3日間培養した。その後、細胞培養上清から本製品でEVを単離・精製した。Input、フロースルー (FT)、単離後のEV溶液 (EV) 中のCD63シグナルを、CD63-Capture ヒトエクソソームELISAキット (ストレプトアビジンHRP) で測定し、EVの回収率を比較した。

[結果]
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2は高いEV回収率を示した。