EV-Up(TM) MSC EV産生用基礎培地, AF EV-Up(TM) EV Production Basal Medium for MSC, AF

EV-Up™ MSC EV産生用基礎培地, AFは間葉系幹細胞 (MSC: Mesenchymal Stem Cell) に特化した細胞外小胞 (EV) 産生用培地です。本製品は動物由来物および血清を含みません。別売のEV-Up™ MSC EV産生用サプリメント, AFを添加して使用することで、エクソソームをはじめとするEVの産生量を向上させることができます。

特長

• 血清添加培地よりEVの産生量が増加
• EVの生物活性が向上
• MSCの生存率を高く維持

適用細胞

由来種を問わず、様々なMSCに使用できます。

細胞例

• 骨髄由来MSC
• 脂肪由来MSC
• 臍帯マトリクス由来MSC

プロトコル

※細胞外小胞の単離はMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2やMassivEV™ EV Purification Column PSなどのPSアフィニティー法を推奨しております。

MSC増殖培地について

本製品は増殖培地の種類を問わずご使用いただけます。当社ではEVの産生を目的としたMSC増殖培地として、MSCulture™ High Growth 基礎培地/サプリメントを販売しております。

プロトコル例 (6ウェルプレートの場合)

1. MSCを5 × 10³/cm²で播種し、増殖培地を用いて80-90 %コンフルエントになるよう培養。
2. 増殖培地を除去。サプリメントを加えたEV-Up™ MSC EV産生用基礎培地を4 mL添加し、3-5日培養。
3. 細胞培養上清を回収し、2,000 x g、20分間遠心。残渣を吸わないように細胞培養上清を新しいチューブに回収。
   ※細胞培養上清の1/100量のEV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬 を添加することで、チューブやチップ等へのEV吸着を抑制できます。
4. PSアフィニティー法などを使用して培養上清からEVを精製。

EV粒子数の比較

各培地でヒト骨髄由来MSCを培養した細胞培養上清からPSアフィニティー法を用いて精製したEVの粒子数を、ナノサイトによるNanoparticle Tracking Analysis (NTA) で測定した。

[結果]
EV-Up™で培養したMSCが放出するEVの粒子数は従来の培地で培養した場合の約2.6倍だった。

EVマーカータンパク質の発現量比較

各培地でヒト骨髄由来MSCを培養した細胞培養上清からPSアフィニティー法を用いてEVを単離し、EVマーカータンパク質 (CD9、CD63、CD81) 量をELISAで測定した。

[結果]
EV-Up™の細胞培養上清には従来培地より多くのEVマーカータンパク質が存在していた。

細胞生存率

血清培地で拡大培養したヒト骨髄由来MSCを各培地を用いて5日間培養し、生存率を測定した。

[結果]
EV-Up™で培養したMSCは従来の培地で培養した場合と同程度の高い生存率を示した。

産生EVの抗線維化活性

ヒト骨髄由来MSCの細胞培養上清からPSアフィニティー法で精製したEV 5 x 10⁸ particles/mLを、TGF-βで刺激したヒト胎児肺由来線維芽細胞 (TIG3細胞) に添加。その後、線維化マーカー (Collagen Ⅲ, α-SMA) のmRNAをRT-PCRで定量し、抗線維化活性を比較した。

[結果]
EV-Up™で培養したMSCから産生されたEVの方が、従来培地で産生されたEVより抗線維化活性が高かった。