EV-Up™ MSC専用エクソソーム産生用培地

• 血清培地よりも多くのエクソソームを分泌
• 高活性のエクソソームを産生可能
• MSCの生存率を高く維持

由来種を問わず、様々なMSCにご使用いただけます。

細胞例

骨髄由来MSC、脂肪由来MSC、臍帯マトリクス由来MSC　など

*1 「EV-Up™ MSC EV産生用基礎培地, AF」に「EV-Up™ MSC EV産生用サプリメント, AF」を添加したもの

6-well plateで培養する場合

1. 各種MSCを5×10³/cm²で播種し、増殖培地 (血清培地 or 無血清培地) を用いて80-90%コンフルエントになるよう培養。
2. 増殖培地を除去し、EV産生用培地を4 mL添加。3-5日培養。
3. 培養上清を回収し、2,000 x g, 20分間遠心し、残渣を吸わないように上清を新しいチューブに回収。
   ※培養上清の1/100量のEV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬 を添加することで、チューブやチップ等へのEV吸着を抑制できます。
4. MagCapture™ エクソソームアイソレーションキットPS などを使用して培養上清からEVを精製。

エクソソーム粒子数

各培地で培養した培養上清からPS affinity^*1法を用いて精製したEVの粒子数を、ナノサイトによるNanoparticle Tracking Analysis技術で測定した。

*1 ホスファチジルセリン (PS) 結合分子を用いて細胞外小胞を金属イオン依存的に捕捉した後、キレート剤により溶出ずる方法。
　　MagCapture™ エクソソームアイソレーションキットの使用により、本手法でのEV精製が行えます。
*2 Exosome-Depleted FBS
*3 EV-Up™ MSC EV産生用基礎培地, AF (製品コード：053-09451) にEV-Up™ MSC EV産生用サプリメント,AF (製品コード：298-84001) を添加したもの

抗線維化活性

各培地で培養した培養上清からPS affinity法でEVを精製した。精製したEV 5 x 10⁸ particles/mLを、TGFβで刺激したヒト胎児肺由来線維芽細胞 (TIG3細胞) に添加し、RT-PCR法を用いた線維化マーカー (Collagen Ⅲ, αSMA) 遺伝子発現定量により、抗線維化活性を比較した。

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細胞生存率

血清培地で拡大培養したヒト骨髄由来MSCを、各培地を用いて5日間培養しEVを産生させた後に生存率を測定した。

エクソソームマーカータンパク質発現

培養上清からPS affinity法でEVを精製しマーカータンパク質CD9、CD63、CD81の発現をELISAで調べた。

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