MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
|
比較
|
製品コード
|
容量
|
価格
|
在庫 / 納期目安
|
|
|---|---|---|---|---|---|
|
|
|
96回用
|
|
|
ドキュメント
キットコンポーネント
96回用
| EV Capture Magnetic Beads | 5.8 mL |
|---|---|
| EV Washing Buffer (10×) | 90 mL |
| EV Binding Enhancer (500×) | 3 mL |
| EV Elution Buffer (10×) | 3 mL |
製品概要
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSは、自動抽出機器 (Thermo Fisher Scientific社 KingFisher™ Flexなど) に対応したPSアフィニティー法による細胞外小胞 (EV) の単離・精製キットです。一度に最大96サンプルからエクソソームなどのEVを単離・精製することが可能で、EVを利用したバイオマーカーの探索やハイスル―プットスクリーニング (HTS) に最適です。
ライセンスについて
本製品は研究用途でご使用ください。営利・商業目的にご使用される場合には、当社 (ffwk-labchem-tec@fujifilm.com) までお問い合わせください。
特長
- 自動抽出機器を用いて、一度に最大96サンプルからEVの単離・精製が可能
- 独自の単離・精製技術である「PSアフィニティー法」により、高純度かつダメージの少ないEVを単離
マニュアルキット (MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2) との違い
本キットはマニュアルの単離・精製キット (MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, コードNo. 290-84103) と比較して、以下のような違いがあります。なおEVの回収効率は同程度です。(「性能データ」参照)
自動抽出
(MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS)マニュアル抽出
(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)Tim4と磁気ビーズの結合方法 磁気ビーズに直接結合
(磁気ビーズとTim4の結合ステップが不要)ビオチン-アビジン系を介して磁気ビーズに結合
(磁気ビーズとTim4の結合ステップが必要)溶出バッファー中の
界面活性剤濃度高い
(磁気ビーズのロスを抑制するため)低い 溶出バッファー中の
EDTA濃度高い
(溶出ステップの回数を減らすため)低い 対応する自動抽出機器およびサンプル
自動抽出機器 対象サンプル (使用が確認できたもの) 最大処理サンプル数 サンプル容量 KingFisher™ Flex (Thermo Fisher Scientific社) 細胞培養上清/血清/血漿/尿 96 (96ディープウェルプレート) ～1 mL 24 (24ディープウェルプレート) 1～5 mL Maxwell® RSC Instrument (Promega社) 血清 16 ～1 mL Maxwell® RSC 48 Instrument (Promega社) 血清 48 ～1 mL Auto-Pure Mini (バイオメディカルサイエンス) 細胞培養上清/血清 16 ～1 mL Maxwell®はPromega Corporationの商標または登録商標です
原理
PSアフィニティー法は、EVの表面に存在するホスファチジルセリン (PS) と特異的に結合するTim4タンパク質を利用した当社独自のEV単離手法です1)。
PS-Tim4結合の高い特異性とキレート剤によるマイルドな溶出で高純度なEVをインタクトな状態で単離できます。
結合
溶出
プロトコル
KingFisher™ FlexによるEVの単離・精製 (アフィニティー反応から溶出まで一連処理する場合)
サンプル
前処理
[マニュアル]Step
01サンプル前処理
サンプルを遠心分離し夾雑物等を沈殿させ、上清を採取するバッファー
調製
[マニュアル]Step
02バッファー調製
EV Washing Buffer (1×) およびEV Elution Buffer (1×) をそれぞれ調製するプレート
準備
[マニュアル]Step
03サンプル調製
1.5 mLマイクロチューブにサンプル (最大1 mL/アッセイ) を分注し、EV Binding Enhancerを添加するStep
04プレート準備
以下7種類のプレートをそれぞれ準備する。
プレート名称(例) 準備 (1) Tip1 96 deep well plateにTip combをセット (2) DWP1_Beads 任意のウェルポジションにEV Capture Magnetic Beads 60 μLとEV Washing Buffer (1×) 940 μLを添加 (3) DWP2_sample (2)と同じウェルポジションにStep 03で調製したサンプル1 mLを添加 (4) DWP3_Washing (2)と同じウェルポジションにEV Washing Buffer (1×) を1 mL添加 (5) DWP4_Washing (6) DWP5_Washing (7) DWP6_Elution (2)と同じウェルポジションにEV Elution Buffer (1×) を100 μL添加 EV
単離・精製
[自動]Step
05装置・プログラムの立ち上げ
KingFisher™ Flexとソフトを立ち上げ、事前設定したプロトコルを作動させるStep
06処理プログラムの開始
プレートとチップをそれぞれ指定の場所にセットし、処理プログラムを開始するStep
07プレート・チップの回収
装置からプレートとチップを回収する。プレート「DWP6_Elution」に単離されたEV溶液が存在する※ アフィニティー反応と溶出を別々のプログラムで実施し、溶出時に用いるTip combを新しくすることで、サンプルに含まれる夾雑物質のキャリーオーバーを低減できる可能性がございます。詳細は取扱説明書をご覧ください。
自動抽出機器別のプロトコル詳細やプログラム設定例は製品の取扱説明書をご覧ください。
【プロトコル】 MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSを用いた多検体からの細胞外小胞精製
(Youtube 2:36)
【プロトコル】[Auto-Pure Mini編] MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSを用いた多検体からの細胞外小胞精製
(Youtube 2:21)
【プロトコル】[Maxwell® RSC Instrument 編] MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSを用いた多検体からの細胞外小胞精製
(Youtube 3:07)
データ
KingFisher™ FlexによるEV単離・精製
NTAによるマニュアルキット (MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2) との粒子数比較
血清、ヘパリン血漿、尿、細胞培養上清 (COLO201) から、MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto) およびMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual) を用いてEVを単離・精製した。EVの粒子数はNanoparticle Tracking Analysis (NTA) にて確認した。
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでも、マニュアルキットと同程度の粒子数を得た。ELISAによるマニュアルキットとのEV回収率比較
血清、ヘパリン血漿、尿、細胞培養上清 (COLO201) から、MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto) およびMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual) を用いてEVを単離・精製した。EVの回収率はPS Capture™ エクソソームELISAキット (ストレプトアビジンHRP) (コードNo. 298-80601) にて確認した。
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでも、マニュアルキットと同程度の回収率を得た。マニュアルキットとのプロテオミクス解析の比較
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Automatic/Automated) およびMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual) を用いて、ヒト血清 200 μLからEVを単離・精製した。回収したEV溶液のプロテオミクス解析を行った。
(1) 同定したタンパク質の種類
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでは、4回の試行において共通して同定できるタンパク質の数がマニュアルキットと比べて多く、再現性がより高いことが示唆された。(2) EVマーカータンパク質の量
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSとマニュアルキットでそれぞれ単離したEVに含まれるEVマーカータンパク質量に有意差はなく、自動化はEVの収率に影響しなかった。(3) 非EVマーカー (アルブミン) の量
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでは、マニュアルキットと比べて非EVマーカーであるアルブミンの量が少なく、より不純物の少ないEVを回収できていることが示唆された。Maxwell® RSC InstrumentによるEV単離・精製
マニュアルキットとの回収率比較
ヒト血清からMagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto) およびMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual) を用いてEVを単離・精製した。EVの回収率はPS Capture™ エクソソームELISAキット (ストレプトアビジンHRP) で測定した。
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでも、マニュアルキットに近い回収率を示した。Auto-Pure MiniによるEV単離・精製
マニュアルキットとの回収率比較
ヒト血清および細胞培養上清 (COLO201) からMagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto) およびMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual) を用いてEVを単離・精製した。EVの回収率はPS Capture™ エクソソームELISAキット (マウスIgG POD) で測定したCD9とCD63のシグナルから算出した。
[結果]
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTSでも、マニュアルキットと同程度の回収率を得た。
参考文献
- Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).
A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles
FAQ
キットの使用について
- 本製品を使用する際に必要な試薬、器具、装置は何ですか。
- 本製品およびKingFisher™ Flexを用いて、EVを単離・精製する際に必要な試薬、器具、装置は以下の通りです。その他の自動抽出機器を使用する場合に必要な器具や装置は本製品の取扱説明書をご確認ください。
(* 印のあるものは操作方法をご確認のうえ、必要に応じてご用意ください)<試薬>
<器具・装置>
- 冷却式遠心分離機 (Max>10,000×g)
- ボルテックスミキサー
- 卓上遠心機
- マイクロピペット
- ピペットチップ
- KingFisher™ Flex (Thermo Fisher Scientific社)
-
KingFisher™ Flex および Presto 用ディープウェル、チップコームおよびプレート
- KingFisher™ Plastics for 96 deep-well format (Thermo Fisher Scientific社, メーカーコード: 97002820) ※サンプル量が 1,000 μL以下の場合
- KingFisher™ Plastics for 24 deep-well format (Thermo Fisher Scientific社, メーカーコード: 97002610) ※サンプル量が1,000 μL～5,000 μLの場合 - 1.5 mL マイクロチューブ*
- 15 mL/50 mL 遠沈管*
-
遠心式限外濃縮ユニット*
- VIVASPIN 6, MWCO 100,000, PES (Sartorius社, メーカーコード: VS0641)
- VIVASPIN 20, MWCO 100,000, PES (Sartorius社, メーカーコード: VS2041) -
遠心式フィルターユニット*
- Ultrafree-MC, GV 0.22 μm, 滅菌済 (Millipore社, メーカーコード: UFC30GV0S)
- Ultrafree-MC, GV 0.45 μm, 滅菌済 (Millipore社, メーカーコード: UFC30HV00)
サンプルについて
- サンプルにEDTA血漿やくえん酸血漿は使用できますか。
- 本製品とKingFisher™ FlexによるEV単離・精製では使用可能なことを確認しています。EDTA 血漿およびくえん酸血漿の場合、サンプルに含まれる抗凝固剤が細胞外小胞と EV Capture Magnetic Beads の結合を阻害します。そのため、ヘパリンナトリウム溶液をアフィニティー反応直前に調製して遠心分離処理済みサンプルへ添加し、精製ステップへお進みください。 (詳細は取扱説明書をご覧ください)
ライセンスについて
- 本製品を営利目的に使用できますか。
- 本製品は研究用途でご使用ください。営利・商業目的にご使用される場合には、当社 (ffwk-labchem-tec@fujifilm.com) までお問い合わせください。
概要・使用例
| 概要 | 本品は、ホスファチジルセリン（PS）に結合するタンパク質と磁気ビーズを用いたアフィニティー法（PSアフィニティー法）により、PSを膜表面に有するエクソソームなどの細胞外小胞を高純度かつ簡便に単離することができるキットです。 自動磁気ビーズ単離装置であるThermo社のKingFisher FlexやPromega社のMaxwell® RSC Instrumentを用いることで多検体から高純度なEVを分離することが可能です。 |
|---|
物性情報
「物性情報」は参考情報でございます。規格値を除き、この製品の性能を保証するものではございません。
本製品の品質及び性能については、本品の製品規格書をご確認ください。
なお目的のご研究に対しましては、予備検討を行う事をお勧めします。
製造元情報
別名一覧
- MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS for HTS
- 掲載内容は本記事掲載時点の情報です。仕様変更などにより製品内容と実際のイメージが異なる場合があります。
- 製品規格・包装規格の改訂が行われた場合、画像と実際の製品の仕様が異なる場合があります。
- 掲載されている製品について
- 【試薬】
- 試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
- 製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
- 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
- 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。