AMV リバーストランスクリプターゼ AMV Reverse Transcriptase

本製品は、大腸菌で発現させたAvian Myeloblastosis Virus（AMV）由来の組換え逆転写酵素であり、酵素活性が高く、RNA を高感度に検出できます。
本酵素は、一本鎖RNA および一本鎖DNA を鋳型としてプライマー存在下でDNA を合成します。巻き戻し活性や、RNA-DNA 二本鎖のRNA を分解するRNase H 活性を有するため、RT-PCR を効率良く行うことができます。用途として、first strand cDNA 合成、cDNA プローブの調製、RT-PCR に応用できます。

特長

• RNA の高感度検出が可能
• 長鎖RNA の逆転写
• 高い熱安定性
• GC-rich RNA からの逆転写

用途

• RT-LAMP法
• first strand cDNA 合成
• cDNA プローブの調製
• RT-PCRへの応用

Isothermal Master Mix 併用アプリケーション (RNA の高感度検出)

ウリ類退緑黄化ウイルス（略称CCYV）に感染しているメロン葉からISOGENを用いてRNAを抽出し、抽出RNA溶液を鋳型として使用した。等温遺伝子増幅試薬Isothermal Master Mixとプライマーセットで標的領域を増幅し、等温増幅蛍光測定装置Genie^® IIでCCYV RNAを検出した。

※ ウリ類退緑黄化ウイルスを検出するためのプライマーセットは、新たな農林水産政策を推進する実用技術開発事業「タバココナジラミにより媒介される新規ウリ科野菜ウイルス病の統合型防除技術体系の開発において、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構九州沖縄農業研究センターによって開発されました。

【結果】
Isothermal Master Mixに含まれるDNAポリメラーゼは逆転写活性を有するため、逆転写酵素を添加しなくてもRNAを検出することができますが、本酵素を添加することにより、検出速度が向上した。また、鋳型RNA量0.5 ngにおいても標的領域を増幅できた（緑の実線）。