ジーエム クイッカー GM quicker

GM quickerは、トウモロコシやダイズなどの穀粒からDNAを抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNAがシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査においては、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物DNA抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、トウモロコシやダイズなどの穀粒からのDNA抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。

本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約45分間という短い時間で高い精製度のDNAを抽出することができます。また、本キットは検査用試料の調製におけるクロスコンタミネーションなど、抽出操作上の問題に配慮した設計となっています。さらに、本キットで使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカメンブレンは、充分なDNA吸着容量と高い溶出効率を確保しています。

特長

• 穀粒から約45分で高精製度のDNAを抽出可能
• 抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒が不要
• 試料のクロスコンタミネーション防止に配慮したキット設計
• 抽出したDNAはPCRや制限酵素反応にそのまま使用可能

GM quickerは、厚生労働省「平成18年6月29日付け食安発第0629002号」において「組換えDNA技術応用食品の検査方法」におけるトウモロコシ、ダイズからのDNA抽出精製方法に収載されました。

使用例1 トウモロコシからのDNA抽出プロトコール

1. トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
2. 50 mL チューブで1.0 g のトウモロコシ粉末試料を秤量し、6 mL のGE1 Buffer および20 µL のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30秒間攪拌する。
3. 10分間室温で静置する。
4. 750 µL のGE2 Buffer を添加し、10-12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
5. 10分間氷冷する。
6. 遠心(≧5 K x g, 10分間, 4 °C)する。
7. 上清4 mL 程度を新しい50 mL チューブに移す。
8. 7で回収した上清から400 µL を1.5 mL マイクロチューブに移し，残った上清は4 °Cで保存する。
9. 50 µL のGB3 Buffer を添加する。
10. 200 µL のエタノールを添加し、10-12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
11. 10の混合液をSpin Column に全量移し、遠心(13 K x g, 30秒間, 4 °C)し、濾液は廃棄する。
12. 600 µL のGW Buffer をSpin Column に添加した後、遠心(13 K x g, 60 秒間, 4° C)し、濾液は廃棄する。
13. Spin Column を新しい1.5 mL マイクロチューブに移す。
14. 50 µL のTE(pH8.0)を滴下した後、3分間室温で静置する。
15. 遠心(13 K x g, 60 秒間, 4 °C)し、濾液を回収する。

使用例2 ダイズからのDNA抽出プロトコール

1. ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
2. 50 mL チューブで1.0 g のダイズ粉末試料を秤量し、12 mL のGE1 Buffer および40 µL のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30秒間攪拌する。
3. 10分間室温で静置する。
4. 1.5 mL のGE2 Buffer を添加し、10-12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
5. 10分間氷冷する。
6. 遠心(≧5 K x g, 10分間, 4 °C)する。
7. 上清8 mL 程度を新しい50 mL チューブに移す。
8. 7で回収した上清から700 µL を2.0 mL マイクロチューブに移し，残った上清は4 °Cで保存する。
9. 250 µL のGB3 Buffer を添加する。
10. 250 µL のイソプロパノールを添加し、10-12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
11. 10で得られた600 µL の混合液をSpin Column に移し、遠心(13 K x g, 30秒間, 4 °C)し、濾液は廃棄する。
12. 10で得られた残りの混合液全量を11のSpin Column に移し、遠心(13 K x g, 30秒間, 4 °C)し、濾液は廃棄する。
13. Spin Column に600 µL のGW Buffer を添加した後、遠心(13 K x g, 60秒間, 4 °C)し、濾液は廃棄する。
14. Spin Column を新しい1.5 mL マイクロチューブに移す。

Data 1： トウモロコシおよびダイズ種子からのDNA 抽出

本キットを用いてトウモロコシおよびダイズの種子からDNA 抽出を行った。
いずれの種子からもDNA を抽出することができた。本キットで抽出したDNA の1/25 量を1 % Agarose S で電気泳動した。

Lane1,8 ：OneSTEP Marker 6(λ/StyⅠdigest)
Lane2-4 ：トウモロコシgenomic DNA
Lane5-7 ：大豆genomic DNA

Data 2： トウモロコシおよびダイズ種子から抽出したDNA の制限酵素消化

本キットで抽出したDNA を制限酵素EcoRⅠ およびHindⅢ で消化した。

Lane1,8 ：OneSTEP Marker 6(λ/StyⅠdigest)
Lane2 ：トウモロコシgenomic DNA intact
Lane3 ：トウモロコシgenomic DNA digest/EcoRⅠ
Lane4 ：トウモロコシgenomic DNA digest/HindⅢ
Lane5 ：ダイズgenomic DNA intact
Lane6 ：ダイズgenomic DNA/EcoRⅠ
Lane7 ：ダイズgenomic DNA/HindⅢ

Data 3： PCR による内在性遺伝子の検出

トウモロコシおよびダイズの内在性遺伝子検出用プライマーを用いて、本キットで抽出したDNA のPCR を行った。 PCR 条件は、農林水産省「組換え食品検査・分析マニュアル」に従った。

Lane1,8 ：OneSTEP Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
Lane2-4 ：トウモロコシgenomic DNAを鋳型にSSllb遺伝子を増幅(151 bp)
Lane5-7 ：ダイズgenomic DNAを鋳型にLe1遺伝子を増幅(118 bp)