1細胞レベルでの解像度で解析を実現

CUBIC Trial Kit

データ提供元:
国立研究開発法人理化学研究所
洲﨑悦生先生、上田泰己先生

CUBIC (clear, unobstructed brain / body imaging cocktails and computational analysis)は、上田泰己博士らにより開発された、組織透明化・3次元イメージング・画像解析の組み合わせによる網羅的細胞解析技術です。CUBICで使用する組織透明化試薬(ScaleCUBIC試薬)は尿素にアミノアルコールを加えた水溶性透明化試薬であり、サンプルを試薬に浸すだけの簡便かつ効果的で再現性の良い手法です。CUBICは動物等の全身・臓器丸ごと透明化することが可能です。さらに、シート照明型蛍光顕微鏡(LSFM)を用いることで、全身の細胞を1細胞解像度で3次元イメージとして取得することが可能です。


CUBICは、1個体の生命現象とその原理を解明できることから、生物学だけでなく、多くの分野においても大きな貢献が期待できます。


本キットは、1) ScaleCUBIC-1 Solution、2) ScaleCUBIC-2 Solution、3) Mounting Solution 1、4) Mounting Solution 2 の4成分で構成されています。キット成分を調整し、透明化を行うことが可能です。

CUBIC 組織透明化プロトコル例 (臓器丸ごと)

組織透明化プロトコルにおいてはサンプルサイズにより、使用する試薬量、処理時間が変わるので注意が必要です。また、サンプルはできるかぎり灌流固定後に摘出・再固定してください。

各工程使用試薬量の目安は 12 - 15 mL です。洗浄は 5 - 10 倍量を目安に使用ください。

*2日ごとに新しい溶液に交換してください。
**Kit中に含まれるMouting Solution 1 と 2 Mounting Solution 2 を 2 : 8、3:7の比率で混合 (RI = ~1.49) し、使用ください。

CUBIC 組織透明化プロトコル例(2 mm スライス切片)

各工程使用試薬量の目安は 2.5 mL です。洗浄は 5 - 10 倍量を目安に使用ください。

**Kit中に含まれるMouting Solution 1 と 2 Mounting Solution 2 を 2 : 8、3:7の比率で混合 (RI = ~1.49) し、使用ください。

CUBIC 蛍光タンパク質発現組織適応例

各工程使用試薬量の目安は 12 - 15 mL です。洗浄は 5 - 10 倍量を目安に使用ください。

*2 日ごとに新しい溶液に交換してください。
**Kit中に含まれるMouting Solution 1 と 2 Mounting Solution 2 を 2 : 8、3:7の比率で混合 (RI = ~1.49) し、使用ください。
***下記データでは、【PI 5 µg/mL in PBS (NaCl 1.5 M), 0.05 % NaN3】を使用しています。

病理学的手法と組み合わせた CUBIC アプリケーション例

Data by S. Nojima.et al. : Scientific Reports, 7, 9269 (2017) / Adapted.


CUBIC 魚類透明化例

データ提供元:東京海洋大学 海洋生物資源学部門 二見邦彦先生

CUBIC 甲殻類(カニ・ダンゴムシ)透明化例

データ提供元:浜松医科大学 医学分光応用寄附研究室 紺野在先生、岡崎茂俊先生

参考文献

  1. E. A. Susaki. et al. : Cell, 157(3), 726 (2014).
  2. K. Tainaka. et al. : Cell, 159(4), 911 (2014).
  3. E. A. Susaki. et al. : Nature Protocols, 10, 1709 (2015).
  4. S. Nojima. et al. : Scientific Reports, 7, 9269 (2017).
  5. S. Ohnuma. et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
  6. A. Konno and S. Okazaki.: Zoological Letters, 4:13(2018).

製品一覧

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