EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キット EV-Perm™ Permeabilization Pretreatment Kit for Exosome Membrane

EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キットは、エクソソームをはじめとする細胞外小胞の膜透過性を向上させる試薬です。抗体などを用いてエクソソーム内部のタンパク質検出が可能になります。

※ 本試薬はPS Capture™ エクソソームELISAキットやPS Capture™ エクソソームフローサイトメトリーキットとご使用ください。また検出用抗体も別途ご用意ください。

特長

• キット付属の試薬(3種類)でエクソソームの膜透過性を向上
• ELISAキットやフローサイトメトリーキットとの併用で、エクソソーム内部のタンパク質を検出可能
• 精製エクソソームの他、細胞培養上清や体液サンプルにも対応

適用サンプル

• 精製したエクソソーム(細胞外小胞)
• 細胞培養上清
• 体液（血清・血漿）サンプル

原理

プロトコル

▼エクソソーム内部タンパク質の検出

EV-Perm^TM エクソソーム膜透過処理用キットとPS Capture^TM エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP) (製品コード 298-80601)を用いたエクソソーム内部タンパク質検出のプロトコルです。より詳細な手順は取扱説明書をご確認ください。

1. エクソソームの捕捉

①Exosome Capture 96 Well Plateの各ウェルを洗浄液(1×)で希釈する
②希釈した検体を各ウェルに分注する
③マイクロプレート振とう器を用いて2時間以上反応させる
④洗浄液(1×)で洗浄する

2. 膜透過性の向上

①透過処理液またはネガティブコントロール溶液をウェルに分注する
②マイクロプレート振とう器を用いて1時間反応させる
③洗浄液(1×)で洗浄する

3. 目的タンパク質の検出

3-1. 一次抗体反応
①目的タンパク質に対するビオチン標識抗体を各ウェルに分注する
②マイクロプレート振とう器を用いて1時間反応させる
③洗浄液(1×)で洗浄する

3-2. HRP-ストレプトアビジン反応
①<font="orange">標識ストレプトアビジン反応液(1×)を各ウェルに分注する
②マイクロプレート振とう器を用いて2時間反応させる
③洗浄液(1×)で洗浄する

3-3. 発色反応
①TMB Solutionを各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約1分攪拌する
②30分間静置反応させる
③室温に戻したStop Solutionを添加する
④速やかに450 nmの吸光度と副波長620 nm (600-650 nm)の吸光度を測定する

PS Capture^TM エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP)の構成品
EV-Perm^TM エクソソーム膜透過処理用キットの構成品

アプリケーションデータ

▼ELISAでの内部マーカー検出

HEK293T細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のAlix、およびH4細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のα-synucleinについて、本試薬で透過処理し、PS Capture^TM エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP)で検出した。

[結果] 透過処理によりエクソソーム内部のAlix、α-synucleinをELISAで検出できた。

▼フローサイトメトリーでの内部マーカー検出

HEK293T細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のAlixおよびエクソソーム表面のCD63について、本試薬で透過処理し、PS Capture^TM エクソソームフローサイトメトリーキットを用いて検出した。

[結果] 透過処理によりエクソソーム内部のAlixをフローサイトメトリーで検出できることが示された。