EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キット

EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キットは、エクソソームをはじめとする細胞外小胞の膜透過性を向上させる試薬です。抗体などを用いてエクソソーム内部のタンパク質検出が可能になります。

特長

• キット付属の試薬(3種類)でエクソソームの膜透過性を向上
• ELISAキットやフローサイトメトリーキットとの併用で、エクソソーム内部のタンパク質を検出可能
• 精製エクソソームの他、細胞培養上清や体液サンプルにも対応

適用サンプル

• 精製したエクソソーム(細胞外小胞)
• 細胞培養上清
• 体液（血清・血漿）サンプル

エクソソーム内部タンパク質の検出

EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キットとPS Capture™ エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP) (製品コード 298-80601)を用いたエクソソーム内部タンパク質検出のプロトコルです。より詳細な手順は製品詳細ページの添付文書をご確認ください。

• エクソソーム内部のタンパク質検出 プロトコル動画
  (Youtube, 05:22)

• 1. エクソソームの捕捉

  ① Exosome Capture 96 Well Plateの各ウェルを洗浄液(1×)で洗浄する
  ② 希釈した検体を各ウェルに分注する
  ③ マイクロプレート振とう器を用いて2時間以上反応させる
  ④ 洗浄液(1×)で洗浄する

  2. 膜透過性の向上

  ① 透過処理液またはネガティブコントロール溶液をウェルに分注する
  ② マイクロプレート振とう器を用いて1時間反応させる
  ③ 洗浄液(1×)で洗浄する

  3. 目的タンパク質の検出

  3-1. 一次抗体反応

  ① 目的タンパク質に対するビオチン標識抗体を各ウェルに分注する
  ② マイクロプレート振とう器を用いて1時間反応させる
  ③ 洗浄液(1×)で洗浄する

3-2. HRP-ストレプトアビジン反応

① HRP標識ストレプトアビジン反応液(1×)を各ウェルに分注する
② マイクロプレート振とう器を用いて2時間反応させる
③ 洗浄液(1×)で洗浄する

3-3. 発色反応

① TMB Solutionを各ウェルに分注し、マイクロプレート振とう器を用いて約1分間攪拌する
② 30分間静置反応させる
③ 室温に戻したStop Solutionを添加する
④ 速やかに450 nmの吸光度と副波長620 nm (600-650 nm)の吸光度を測定する

PS Capture™ エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP)の構成品
EV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キットの構成品

ELISAでの内部マーカー検出

HEK293T細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のAlix、およびH4細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のα-synucleinについて、本試薬で透過処理し、PS Capture™ エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP)で検出した。

[結果] 透過処理によりエクソソーム内部のAlix、α-synucleinをELISAで検出できた。

フローサイトメトリーでの内部マーカー検出

HEK293T細胞培養上清から精製したエクソソーム内部のAlixおよびエクソソーム表面のCD63について、本試薬で透過処理し、PS Capture™ エクソソームフローサイトメトリーキットを用いて検出した。

[結果] 透過処理によりエクソソーム内部のAlixをフローサイトメトリーで検出できることが示された。