PS Capture™ エクソソームフローサイトメトリーキット

PS Capture™ エクソソームフローサイトメトリーキットはTim4タンパク質と磁気ビーズを利用したPSアフィニティー法によって、エクソソームなどの細胞外小胞 (EV) を磁気ビーズ上に固定化し、EVマーカータンパク質をフローサイトメトリーで高感度に検出するキットです。

PSアフィニティー法は、金沢大学 ナノ生命科学研究所の華山教授と共同で開発したEVの表面に存在するホスファチジルセリン (PS) と特異的に結合するTim4タンパク質を利用した独自のEV単離手法です¹⁾。PS-Tim4結合の高い特異性とキレート剤によるマイルドな溶出で高純度なEVをインタクトな状態で単離できます。

① EVの単離
Exosome Capture Beadsにより、EVをサンプル中から単離する。

② EVの染色
蛍光標識 抗EVマーカー抗体により、EVを染色する。

③ フローサイトメトリー解析
磁気ビーズにEVを結合させたまま、フローサイトメトリー解析を行う。

細胞培養上清に含まれるEVの表面抗原解析

K562細胞の細胞培養上清 (33 μL/アッセイ) に含まれるEVを、本製品および他社製品 (抗CD9、CD63、CD81抗体固相化磁気ビーズ) により固定化し、蛍光標識抗CD9、CD63、CD81抗体を結合させた後、フローサイトメトリーによりEV表面抗原の解析を行った。

磁気ビーズのカウント数

磁気ビーズのカウント数

• アイソタイプコントロール
• PE標識抗CD9抗体
  (Novus Biologicals社、メーカーコードNo. NB100-77915PE)
• PE標識抗CD63抗体
  (BD Biosciences社、メーカーコード 556020)
• PE標識抗CD81抗体
  (Novus Biologicals社、メーカーコード NBP1-44861PE)

参考データ －S/B比の比較－

① PS Capture™ エクソソームフローサイトメトリーキット
② 他社製品： 抗CD81抗体固相化磁気ビーズ
③ 他社製品： 抗CD9抗体固相化磁気ビーズ
④ 他社製品： 抗CD63抗体固相化磁気ビーズ

[結果]
本製品を用いて、EV表面抗原を高いS/B比で検出できた。

血清・血漿に含まれるEVの表面抗原解析

ヒト血清、ヘパリン血漿、EDTA血漿 (バッファー交換済み) それぞれ100 μLに含まれるEVを磁気ビーズ上に固定化し、PE標識抗マウスIgGアイソタイプコントロールおよびPE標識抗ヒトCD9抗体によりEVの検出を行った。

磁気ビーズのカウント数

• PE標識抗マウスIgGアイソタイプコントロール
• PE標識抗ヒトCD9抗体
  (Novus Biologicals社、メーカーコードNB100-77915PE)

[結果]
本製品を用いて、ヒト血清、血漿 (ヘパリン/EDTA) に存在するEVのCD9が検出できた。

EVの内部マーカー検出

HEK293T細胞培養上清から精製したEVをEV-Perm™ エクソソーム膜透過処理用キット (コードNo. 294-85701) で透過処理し、EV内部のAlixおよびEV表面のCD63について、本製品を用いたフローサイトメトリーで検出した。

[結果]
透過処理によりエクソソーム内部のAlixをフローサイトメトリーで検出できることが示された。

本製品は研究用途でご使用ください。営利・商業目的にご使用される場合には、当社 (ffwk-labchem-tec@fujifilm.com) までお問い合わせください。

1. Nakai, W. et al.: Sci. Rep., 6(1), 1(2016).
   A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles