PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit

本製品は、ホスファチジルセリン(PS)特異的に結合するTim4タンパク質と磁気ビーズを利用した新規アフィニティー(PSアフィニティー)法¹⁾によって細胞外小胞を磁気ビーズ上に捕捉し、表面マーカータンパク質をフローサイトメトリーによって高感度に検出します。また、細胞培養上清や体液検体(血液・血漿)から細胞外小胞を精製せず、表面マーカータンパク質の直接定性解析もできます。

ご使用前に、各表面マーカータンパク質に対する一次抗体および蛍光色素標識済み二次抗体、または蛍光色素標識済み一次抗体をご用意ください。

参考文献

1. “A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles”, W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura ＆ R. Hanayama, Sci Rep 6, 33935 (2016).

特長

• FCMによる高感度定性解析
• 磁気ビーズによる簡単操作
• 検体を直接検出可能(精製不要)
• 単離から染色まで 3 時間で完了

測定原理

対応サンプル

• 細胞培養上清
• 血清
• 血漿(ヘパリンまたは EDTA)

操作概要　基本プロトコール(２反応分)

各種サンプルの前処理フロー

• 細胞培養上清の場合

  

• 血清・ヘパリン血漿の場合

  

• EDTA血漿・クエン酸血漿の場合

  

EDTA血漿・クエン酸血漿の前処理

抗凝固剤であるEDTA、クエン酸は細胞外小胞とExosome Capture Beadsの結合を阻害します。そのためヘパリンナトリウム溶液による前処理を行ってください。

1. 精製水で1,000 U/mL ヘパリンナトリウム溶液を作製する。［使用製品例：製品コード 085-00134］
2. 10,000 × g 遠心分離上清画分100 μLに1/200容量のヘパリンナトリウム溶液を添加（終濃度5 U/mL）し、混合する。
3. 1/20容量のExosome Binding Enhancer (100×)を添加し、混合する。
4. 単離ステップへ進む。

各反応数における試薬およびサンプル使用量

細胞外小胞の単離工程では、1.5 mL 容マイクロチューブを用いた反応系(2 反応分)を基本プロトコールに設定しています。

反応スケールを大きくする場合、Exosome Capture Beads 使用量、サンプル量を下の表に従いスケールアップする必要があります。

• 1.5 mL 容マイクロチューブ1本あたり、10 反応分が最大になります。

反応数	Exosome Capture Beads (µL)	サンプル量(µL)
2 反応分 (基本)	30	100
3 反応分	40	133
4 反応分	50	167
5 反応分	60	200
6 反応分	70	233
7 反応分	80	267
8 反応分	90	300
9 反応分	100	333
10 反応分	110	367

K562 細胞培養上清に含まれるエクソソームの表面抗原解析

K562 細胞培養上清に含まれるエクソソームを本製品または他社品(抗 CD81, CD9, CD63 抗体固相化磁気ビーズ)により固定化し、蛍光標識抗 CD63、CD9、CD81 抗体を結合させた後、フローサイトメトリーによりエクソソーム表面抗原の検出を行った。

サンプル

K562 細胞培養上清 33 µL/Assay

検出抗体

PE 標識抗 CD63 抗体(製品コード:556020, BD Biosciences社)
PE 標識抗 CD9 抗体(製品コード:NB100-77915PE, Novus Biologicals社)
PE 標識抗 CD81 抗体(製品コード:NBP1-44861PE, Novus Biologicals社)

血清、血漿に含まれるエクソソームの表面抗原解析

ヒト血清、ヒト血漿(EDTA 血漿、ヘパリン血漿)に含まれるエクソソームを磁気ビーズ上に固定化し、PE 標識マウス IgG アイソタイプコントロールおよび PE 標識抗ヒト CD9 抗体によりエクソソームの検出を行った。

サンプル

ヒト血清、ヘパリン血漿、EDTA 血漿（バッファー交換済み）33 µL/Assay

検出抗体

PE 標識抗 CD9 抗体(製品コード:NB100-77915PE, Novus Biologicals社)

富士フイルム和光純薬株式会社の製品(以下、本品）をご購入後は、研究用途でご使用ください。本品を営利・商業目的にご使用される場合には、弊社お客様相談室（ffwk-labchem-tec@fujifilm.com）までお問い合わせください。