カスケード クリスパーRNA複合体, hB2M
Cascade-crRNA complex, hB2M
- 製造元 :
- (株)ニッポンジーン
- 保存条件 :
- -80℃ (ドライアイス輸送)
- 構造式
- ラベル
- 荷姿
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比較
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製品コード
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容量
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価格
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在庫
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250μg
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ドキュメント
- スペクトルデータ
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- 検査成績書
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- 校正証明書
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キットコンポーネント
製品概要
本品は、CRISPR-Cas3ゲノム編集用のCascadeタンパク質とCRISPR RNA (crRNA)の複合体で、複数の核移行シグナル(NLS)が付与されています。crRNAはヒトのbeta-2-microglobulin(B2M)遺伝子を標的としています。
Cas3 protein NLSと組み合わせると、標的配列を含むDNAを切断することができます。
本品は特定の実験系において、ヒトB2M遺伝子に対してゲノム編集効果が確認されています。CRISPR-Cas3システムの実験系を新しく立ち上げる際に、本品とCas3 protein NLS を組み合わせて予備実験に使用することができます。
特長
- CRISPR-Cas3システムの実験系立ち上げの際の予備実験に使用可能
- ヒト beta-2-microglobulin（B2M）遺伝子を標的としたCascade-crRNA複合体
- 本品とCas3 protein NLSを組み合わせることで標的配列を含むDNAを切断することが可能
- 核移行シグナル（NLS）を付与
| 起源 | 遺伝子組換え大腸菌 |
|---|---|
| 濃度 | 25 µg/µL Cascade-crRNA複合体（hB2M） |
| 形状 | 20 mM HEPES-NaOH(pH7.0), 350 mM NaCl |
| 保存温度 | - 80℃ |
| 分子量 | 396,819 (アミノ酸配列より算出) |
| hB2M遺伝子情報 | |
|---|---|
| 由来 | Homo sapiens (human) |
| 遺伝子名 | beta-2-microglobulin (B2M) |
| 標的配列情報 | |
| 配列 | 5ʼ- AAG GCA TGC ACT AGA CTG GGT GAG TTT GCT GT -3ʼ |
使用例
使用例1 細胞でのゲノム編集評価 （データ提供：C4U株式会社）
β2-ミクログロブリンをコードするB2M遺伝子をターゲットとして実験を行った。エレクトロポレーション法でHEK293T細胞へCas3 protein NLS（Code No.311-09441）及びCascade-crRNA complex, hB2M（Code No.312-09471） を導入し、培養3日後にFlow CytometoryでB2M遺伝子のノックアウトをHLA-A抗体を使って確認した。また、B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているかをクローニング及びシーケンス解析により確認した。
＜実験方法＞
- RNP（Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体） 各種を調製
- 細胞懸濁液を用意（0.3 x 106 cells/well）
- エレクトロポレーション（下記：実験条件）
- エレクトロポレーション後、3 日目にFlow CytometoryでB2M遺伝子の発現を測定
- KO率を計算
＜実験条件＞
【エレクトロポレーター】 4D-Nucleofector® (Lonza社)
【Pulse Code】DG150
【細胞】HEK293T細胞, 0.3 x 106 cells/well
【RNP】100 pmol each/well (6 well plate)
Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体を導入した試験区では平均して18.1%の細胞にB2M遺伝子が発現していないことを確認した。(n=3)
シーケンス解析による欠損領域の確認
B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているか、TAクローニングおよびシーケンス解析により確認した。
使用例2 in vitro での基質DNAの切断確認
Cas3 protein NLS および Cascade-crRNA複合体を用いて、PAMと標的配列を含むPlasmid DNAの切断確認を行った。
＜反応系＞
5 mM HEPES-KOH (pH 7.5)
60 mM KCl
10 mM MgCl2
10 µM CoCl2
2.5 mM ATP
0.24 µM Cas3 protein NLS
0.20 µM Cascade-crRNA複合体
100 ng Plasmid DNA
＜反応条件＞
37°C、5分間反応
↓
SDS含有のLoading Buffer(Code No. 313-90111)を添加し、
アガロースゲル電気泳動
1% Agarose S
M : Gene Ladder Fast 2
[参考文献] Yoshimi, K. et al.:Nature Communications, 13:4917 （2022）
| レーン | Cas3 protein | Cascade-crRNA | Plasmid DNA |
|---|---|---|---|
| 1 | + | + | +(標的配列) |
| 2 | - | - | +(標的配列) |
| 3 | + | + | +(非標的配列) |
| 4 | - | - | +(非標的配列) |
| 5 | - | + | +(標的配列) |
| 6 | + | - | +(標的配列) |
結果
PAMおよび標的配列を含むPlasmid DNA（レーン１）において切断を確認した。一方、非標的配列を含むPlasmid DNA（レーン3）において切断は確認されなかった。
製造元情報
別名一覧
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