Cas3 プロテイン NLS Cas3 protein NLS

本品は、Escherichia coli由来のCas3タンパク質です。Cas3遺伝子を有する組換えバキュロウイルスに感染した昆虫細胞を用いて発現させたタンパク質で、アフィニティ精製を経たものとなります。
核移行シグナル (NLS) を有しており、ガイドRNA (Cascade-crRNA複合体) と組み合わせることでCRISPR-Cas3ゲノム編集に利用することができます。

特長

• 15 µg/µLの高濃度品
• 核移行シグナル (NLS) を付加
• CRISPR-Cas3ゲノム編集でゲノムの大規模欠損が可能

使用例1　in vitro での切断チェック

反応液組成

↓
37°C、5分間
↓
アガロースゲル電気泳動^*3

*1　5 x Reaction Buffer組成：25 mM HEPES-KOH (pH 7.5), 300 mM KCl, 50 mM MgCl2, 50 µM CoCl2
*2　基質DNAはPAM配列(AAG)と32塩基の認識配列を含みます。
*3　正確な泳動結果を得るため、SDSを含むLoading Buffer（Code No. 313-90111など）の使用をお勧めします。

使用例2　in vitro での基質DNAの切断確認

Cas3 protein NLS および Cascade-crRNA複合体を用いて、PAMと標的配列を含むPlasmid DNAの切断確認を行った。

レーン	Cas3 protein	Cascade-crRNA	Plasmid DNA
1	+	+	+(標的配列)
2	-	-	+(標的配列)
3	+	+	+(非標的配列)
4	-	-	+(非標的配列)
5	-	+	+(標的配列)
6	+	-	+(標的配列)

結果

PAMおよび標的配列を含むPlasmid DNA（レーン１）において切断を確認した。一方、非標的配列を含むPlasmid DNA（レーン3）において切断は確認されなかった。