Cas3 プロテイン NLS
Cas3 protein NLS
- 製造元 :
- (株)ニッポンジーン
- 保存条件 :
- 冷凍 (ドライアイス輸送)
- 構造式
- ラベル
- 荷姿
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比較
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製品コード
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容量
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価格
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在庫
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150μg
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ドキュメント
- スペクトルデータ
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- 検査成績書
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- 校正証明書
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製品説明
本品は、Escherichia coli由来のCas3タンパク質です。Cas3遺伝子を有する組換えバキュロウイルスに感染した昆虫細胞を用いて発現させたタンパク質で、アフィニティ精製を経たものとなります。
核移行シグナル (NLS) を有しており、ガイドRNA (Cascade-crRNA複合体) と組み合わせることでCRISPR-Cas3ゲノム編集に利用することができます。
特長
- 15 µg/µLの高濃度品
- 核移行シグナル (NLS) を付加
- CRISPR-Cas3ゲノム編集でゲノムの大規模欠損が可能
使用例
使用例1 in vitro での切断チェック
反応液組成
| Cas3 protein NLS | 0.5 µg |
| Cascade-crRNA複合体 | 1.6 µg |
| 5 x Reaction Buffer*1 | 4 µl |
| 50 mM ATP | 1 µl |
| 基質DNA*2 | 100 ng |
| d.d.H2O | up to 20 µl |
↓
37°C、5分間
↓
アガロースゲル電気泳動*3
*1 5 x Reaction Buffer組成：25 mM HEPES-KOH (pH 7.5), 300 mM KCl, 50 mM MgCl2, 50 µM CoCl2
*2 基質DNAはPAM配列(AAG)と32塩基の認識配列を含みます。
*3 正確な泳動結果を得るため、SDSを含むLoading Buffer（Code No. 313-90111など）の使用をお勧めします。
使用例2 in vitro での基質DNAの切断確認
Cas3 protein NLS および Cascade-crRNA複合体を用いて、PAMと標的配列を含むPlasmid DNAの切断確認を行った。
＜反応系＞
5 mM HEPES-KOH (pH 7.5),
60 mM KCl,
10 mM MgCl2,
10 µM CoCl2
2.5 mM ATP,
0.24 µM Cas3 protein NLS,
0.20 µM Cascade-crRNA複合体,
100 ng Plasmid DNA
＜反応条件＞
37°C、5分間反応
↓
SDS含有のLoading Buffer(Code No. 313-90111)を添加し、
アガロースゲル電気泳動
1% Agarose S
M : Gene Ladder Fast 2
[参考文献] Yoshimi, K. et al.:Nature Communications, 13:4917 （2022）
| レーン | Cas3 protein | Cascade-crRNA | Plasmid DNA |
|---|---|---|---|
| 1 | + | + | +(標的配列) |
| 2 | - | - | +(標的配列) |
| 3 | + | + | +(非標的配列) |
| 4 | - | - | +(非標的配列) |
| 5 | - | + | +(標的配列) |
| 6 | + | - | +(標的配列) |
結果
PAMおよび標的配列を含むPlasmid DNA（レーン１）において切断を確認した。一方、非標的配列を含むPlasmid DNA（レーン3）において切断は確認されなかった。
製造元情報
別名一覧
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