温度応答性細胞培養容器 ~低温の培地を添加するだけで接着細胞をダメージなく剥離~

Cepallet® シリーズ

DIC株式会社の「Cepallet®(セパレット)」は、低温の培地を添加するだけで細胞を回収することができる温度応答性培養容器です。酵素やスクレーパーを使用しないため、細胞にダメージを与えません。
特殊ポリマーで容器の表面を処理しており、細胞培養する温度では容器表面は細胞が接着しやすい表面(疎水性)ですが、温度を下げると接着しにくい表面(親水性)となり細胞が剥がれます。
種々の細胞に適用できるようにS-type(幹細胞向け)とW-type(汎用)の2種類をラインアップしています。

特長

  • 簡便操作
    ・低温の培地を添加するだけ
    ・PBSリンスや酵素添加は不要
    ・培養工程の自動化に適している
  • 細胞へのダメージなく高収率
    ・酵素、スクレーパーを使わない
    ・細胞の表面抗原が消失しない
    ・細胞外マトリックスを保持したまま細胞を剥離

温度応答性剥離方法

Cepallet® を使用した温度応答性剥離方法

適用細胞(例)

・iPS細胞由来分化細胞 ・神経細胞 ・間葉系細胞 ・マクロファージ
・線維芽細胞 ・初代培養細胞 ・株化細胞 など

使用法

株化細胞の培養・回収例

「Cepallet®」を用いれば、酵素を使わずに回収できます。
酵素処理による細胞や神経突起などへのダメージを抑えることができます。

培養条件

    • 通常お使いの培養方法と同じように播種してください。
    • 培地交換に使用する培地類は、あらかじめ37℃で加温したものを使用してください。
    • 培地の温度が低下すると細胞が剥離しやすくなるので、長時間の顕微鏡観察は避けてください。
    • 接着性の低い細胞の場合は、細胞外マトリックスで基材をコーティングしてお使いください。
    • 基材の特性上、通常の培養基材のコーティングより長めのインキュベーションをおすすめしています。
      (低温ではコーティング不良になることがあります。)

温感剥離

      1. 細胞を培養した Cepallet® をインキュベーターから出す。
      2. 培地をアスピレーターで除去する。
      3. 培養表面に、低温 (4℃~室温)の培地を添加する。※添加量は 35 mm dish で 1 mL
      4. 室温で 10~30 分間静置する。(細胞種によって、剥離にかかる時間が異なります。)
      5. P1000 のマイクロピペットで培地をプレート表面に数回流しかけ、チューブに回収する。
      6. 必要に応じて 5. の操作を 2, 3 回繰り返す。
      7. 遠心分離で上清を除去する。 ※酵素を使用していないので遠心せずに、再播種も可能。
      8. 回収した細胞は再播種等に用いる。

使用例

間葉系幹細胞の温感剥離

  • 培養条件
    • 細胞:ヒト骨髄由来間葉系幹細胞
    • 培養期間:3日間
    • 培地:Mesenchymal Stem Cell Growth Medium (Promocell社)

間葉系幹細胞の温感剥離

Cepallet®で培養、
温度を下げ(冷培地交換)細胞を回収
 → 通常の培養容器に再播種
通常の培養容器で培養、
酵素処理で細胞を回収
 → 通常の培養容器に再播種
培養条件
  • 細胞:ラット副腎褐色細胞腫
  • 培養期間:12日間
  • 培地:50 ng/mL NGF, RPMI-1640, 10%Horse Serum,
       5%FBS, 50 µg/mL ゲンタマイシン
豊富に突起を伸ばす 突起を出す細胞は出現するが、
細胞間ネットワークが弱い

酵素によるダメージがないので、再播種した際に神経突起が豊富に伸展している

活性化マクロファージ(THP-1細胞 PMAで活性化)の剥離

培養条件

2日目培養、50 ng/mL PMAで活性化

  • 細胞:THP-1細胞
  • 培地:RPMI-1640, 10%FBS, 50 µg/mL ゲンタマイシン

活性化マクロファージも器材表面からきれいに剥離
回収率はトリプシン処理と比べて大幅に向上

製品一覧

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ディッシュ(汎用)

ディッシュ(幹細胞向け)

プレート(汎用)

プレート(幹細胞向け)

フラスコ(汎用)

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