抗体医薬、ワクチン等のバイオ医薬品製造に

c-LEcta社 エンドヌクレアーゼ 「DENARASE®

DENARASE®は、Serratia marcescens 由来の高活性エンドヌクレアーゼです。
本製品は、バイオ医薬品製造におけるウイルスベクター製造時に、宿主細胞やプラスミドに残存するDNA やRNA の除去に使用するために使用します。分解されたヌクレオチドは、その後の精製工程で容易に除去することができます。
バイオ医薬品製造における最も厳しい規制および品質要件を満たしています。

photo:GMP製造用 DENARASE®

アプリケーション

  • ウイルスワクチン
  • 細胞・遺伝子治療用ウイルスベクター
  • ライセートの粘度低減
  • 電気泳動やクロマトグラフィーでのサンプル調整
photo:研究開発用 DENARASE®

DENARASE® は、2つの品質グレードがあります。

  • 研究開発用 DENARASE® 
  • GMP製造用 DENARASE® 
  • DENARASE®  GMP グレードは、EU GMP 条件下で製造
  • DENARASE®  研究開発用グレードは、ISO 9001 規格に準拠して製造

DENARASE® 特長

高い品質と安全性

  • 動物由来原料および抗生物質を含まない製造
  • エンドトキシンフリーを実現(特許取得済みの製造方法、生産菌株:Bacillus 菌)
  • 高い活性と99%以上の高い純度

完全なコンプライアンス

  • ドイツ EU GMP 条件下で製造
  • EXCiPACT および ANSI NSF 363 規格の適合認定(医薬品賦形剤のGMP/GDPを満たしています)
  • 米国FDAドラッグマスターファイルによる医薬品の米国市場承認取得のための専用規制当局サポート

テクニカルサポート

DENARASE® バリデーションレポートは同社HPにて個人情報入力の上、オンデマンドで入手可能です。

  • 製品および製造に関する説明
  • 製品仕様
  • アプリケーションデータ
  • 規制証明書
  • 輸送および保管安定性

DENARASE® 製品仕様

DENARASE®は、Bacillus sp. 製造宿主による微生物発酵によって生産された組換えSerratia marcescens エンドヌクレアーゼです。製品の製造に使用される生産菌株は、安全レベルS1でエンドトキシンを含まない遺伝子組み換え生物(GMO)です。 本製品は液体として供給され、20mM Tris-HCl(pH8.0±0.2)、20mM NaCl、2mM MgCl2、50%グリセロール(v/v)で構成されています。

パラメーター 試験方法 仕様
外観 目視 透明
活性 光度計 > 250 U/µl
タンパク質純度 SDS-PAGE 及び 銀染色 > 99 %
特異的活性 タンパク質含量あたりの活性は、モル吸光計数(44,600 L x mol-1 x cm-1)を用いて測定 > 6✕105 U/µl
プロテアーゼ活性 プロテアーゼ検出アッセイ 検出されない
エンドトキシン LAL テスト
(acc. to Ph. Eur. 2.6.14, Method C)
< 0.25 EU/kU
総菌数 TAMC / TYMC acc. to Ph. Eur. 2.6.12 好気性細菌:<5 cfu/200 μl
酵母 / カビ:<5 cfu/200 μl

※ Unit-Definition: One unit (U) will digest salmon sperm DNA to acid-soluble oligonucleotides equivalent to a ΔA260nm of 1.0 in 30 min at pH 8.0 at 37 °C.

DENARASE® 特性

DENARASE® はヌクレオチド間のホスホジエステル結合を特異的に加水分解し、3-5 塩基対程度の小さな断片を残します。この酵素は、一本鎖、二本鎖、直鎖、環状、スーパーコイル状など、あらゆる形態の核酸に活性を示し、DNAを放出する前に酵素を添加すると、最良の結果が得らます。

  • 分子量(計算値): 27 kDa(同一のサブユニットを2つ持つ二量体)
  • 至適pH:pH 8.0~9.0
  • 至適温度 37 °C
  • 等電点(pl、計算値):pH 6.2
  • 補因子:Mg2+

Effect of Temperature and pH value

Graph image

Fig. 1: Effect of temperature

最適な反応温度を決定するために、DENARASE® 活性を異なる温度で標準条件下で測定した。最適な反応温度は37℃である。40℃以上の温度は推奨されない。
Graph image

Fig. 2: Effect of pH value in different buffer systems

DENARASE® の至適pHを決定するために、異なる緩衝液と異なるpH値で活性を測定した。DENARASEは試験したほぼすべての緩衝液系で高い活性を示し、pH8.0から9.0の間で至適pHを示した。

The effect of low and high Magnesium Chloride

DENARASE® は、補因子としてMg2+ を使用しており、酵素活性には最小量必要です。
本製品は、最適な活性を得るために1~2mM のMg2+ 陽イオンを必要とします。(図3 参照)
MgCI2 の過剰摂取は、活性を低下させます。(図4 参照)

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Fig. 3: Effect of low Magnesium Chloride concentrations on DENARASE® activity

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Fig. 4: Effect of high Magnesium Chloride concentrations on DENARASE® activity

https://denarase.c-lecta.com/enzyme-characteristics

DENARASE® 安定性および保存条件

DENARASE®は-20℃の保存温度において、製造日から少なくとも24ヶ月間は規格範囲内で安定です。注意:凍結により活性が失われるため、-70℃以下での保管を推奨いたしません。

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研究開発用

GMPグレード

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ELISA Kit

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