StemSure^®血清代替品

• キメラマウス作製とジャームライントランスミッション確認。
• マウスES細胞・ヒトiPS細胞培養時に血清の代替品として使用できることを確認。
• 毒劇物非該当品。

• コロニー形成試験（マウスES細胞D3株を使用）
• アルカリホスファターゼ試験（マウスES細胞D3株を使用）
• 無菌試験
• pH
• 浸透圧
• エンドトキシン
• マイコプラズマ試験

HaloTag^® cDNAを組み込んだターゲッティングベクターをマウスES細胞に導入し、StemSure^® 血清代替品（SSR）を含む培地で培養した。ベクターが導入されていることを確認したマウスES細胞をホストとなるICRマウスの胚盤胞に注入し、ICRマウスの子宮に移植した。得られたキメラマウスとC57BL/6Jマウスを交配させ、F1マウスを得た。

キメラマウス

キメラマウスより血球を回収し、テトラメチルローダミンによりHaloTag^® タンパク質を染色した。マウスES細胞由来のHaloTag^® が発現した血球が染色され、キメラ化していることを確認できた。

F1マウス

F1マウスでは、すべての血球でHaloTag^® が発現した個体が出現したことから、SSRを含む培地で培養したES細胞由来の個体が正常に生まれていることが確認できた。

<データ提供 筑波大学 生命科学動物資源センター　三輪 佳宏 先生>
Halo Tag^®は、Promega社の登録商標です。

コロニー形態とALP染色

StemSure^® 血清代替品（SSR）を用いて、ヒトiPS細胞201B7株を培養できることを確認した。また、ALP染色が陽性であることを確認した。

未分化マーカー発現の確認

SSRを用いてヒトiPS細胞201B7株を培養し、各種未分化マーカー（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）が陽性であることを確認した。

細胞形態とALP染色

StemSure^® シリーズを用いてマウスES細胞D3株を培養し、マウスES細胞特有の光沢のあるコロニーを観察できた。また、ALP染色が陽性であることも確認した。

細胞増殖曲線

各培地でマウスES細胞D3株を14継代培養した後、細胞増殖について比較した。下図のようにStemSure^® シリーズはA社製品と同等の性能を示した。

細胞集団倍加数

各培地でマウスES細胞D3株を用いて継代培養し、培養日数と細胞集団倍加数との関係を調べた。下図よりStemSure^® シリーズはA社製品と同等の細胞集団倍加数であることを確認した。

未分化マーカー発現の確認

StemSure^® シリーズを用いてマウスES細胞D3株を8継代培養し、各種未分化マーカー（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）が陽性であることを確認した。

< 培地組成 >
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF

テラトーマ形成の確認

StemSure^® シリーズを用いてマウスES細胞D3株を継代培養した。その細胞を免疫不全マウスの皮下にインジェクションした。皮下にテラトーマが形成され、その内部に神経組織（外胚葉由来）、軟骨組織（中胚葉由来）、繊毛上皮を伴う管腔構造（内胚葉由来）などを確認した。

< 培地組成 >
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF