CTGF(全長+N末領域) ELISAキットワコー CTGF(Full+N-terminal region) ELISA Kit Wako

結合組織成長因子(CTGF: Connective Tissue Growth Factor)は臍静脈や血管内皮細胞から産生される約38 kDaの分泌タンパク質です。細胞接着や軟骨細胞の増殖・分化などに関与することが知られているほか、組織線維化の主要因子と考えられており、線維症のマーカー候補として報告されています。

CTGFはModule 1-4の4つのドメインで構成されており、その中でもModule 3-4が切断されたN末領域のCTGF (Module 1-2)が特発性肺線維症 (IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)のバイオマーカーとして期待されています¹⁾。しかしながら、血液中ではN末領域のCTGFと血小板由来の全長CTGFが混ざっており、N末領域のCTGFのみを正確に測定することが困難でした。

本品はCTGF Module 1 を認識するモノクローナル抗体とModule 2を認識するモノクローナル抗体を用いてCTGF (全長)およびCTGF (N末領域)を検出するELISA キットです。CTGF (全長)ELISA キットワコー (製品コード 290-84701)と併用することで血中のN末領域のCTGF量を測定可能です^2）。

• キット性能

  測定対象	CTGF (全長) およびCTGF (N末領域)
  測定対象検体	ヒト血清 / 血漿 (EDTA） ※ ヘパリン血漿は非推奨 ※ マウスの血清・血漿は測定不可
  検量線範囲	7.81 - 500 pM
  必要検体量	ヒト血清: 5 μL ヒト血漿(EDTA) : 10 μL
  測定時間	2時間50分
  検出法	発色

• 測定原理

  

添加回収試験

希釈直線性試験

• ヒト血清

  

• ヒト血漿

  

交差性

• 全長、N末断片、C末断片との交差性

  
  

  

  [結果]
  CTGF (全長+N末領域) ELISAキットワコーは全長とN末断片を特異的に測定できた。

• CCNファミリーとの交差性

  CTGFを含むCCNファミリーとの交差率(500pM, n=8)を 確認した。

  分子	交差率 (%)
  CCN1	N.D.
  CCN2 （CTGF）	100
  CCN3	N.D.
  CCN4	N.D.
  CCN5	N.D.
  CCN6	N.D.

  N.D.未検出

  [結果]
  当社キットはCCNファミリーの中で、CCN2(CTGF)に高い特異性を示した。

各社キットにおけるCTGF反応性の比較

濃度既知のヒトCTGFリコンビナントタンパク質(rHuman CTGF) ① 全長、② N末領域、③ C末領域をそれぞれ段階希釈し、各社キットで測定した。測定手順は各社キットの取扱説明書に従った。

CTGFへの反応性

	① rHuman CTGF(全長）	② rHuman CTGF(N末領域）	③ rHuman CTGF(C末領域）
CTGF(全長＋N末領域) ELISAキットワコー	＋	＋	－
CTGF(全長) ELISAキットワコー	＋	－	－
R社キット	＋	－	N.D.
M社キット(N末領域)	－	－	－

＋: 反応する、 －: ほとんど反応しない、N.D.: 未検出

[結果]
CTGF(全長＋N末領域) ELISAキットワコーはCTGF(全長)およびCTGF(N末領域)に、CTGF(全長) ELISAキットワコーはCTGF(全長)にそれぞれ高い反応性を示した。
R社キットはCTGF(全長) にのみ高い反応性を示した。M社キット(N末領域)は当社で検討したいずれのCTGFにもほとんど反応しなかった。

N末領域CTGFの測定 (希釈直線性試験)

段階希釈したヒト血清もしくはヒト血漿(EDTA)を用いて、CTGF (全長＋N末領域) ELISAキットワコーでCTGFの全長+N末領域を、CTGF (全長) ELISAキットワコー (製品コード 290-84701)でCTGFの全長を測定した。さらにその差分からN末領域CTGFの量を求め、希釈直線性を確認した。

• 検体	希釈 倍率	CTGF (全長＋N末領域) (pM)	CTGF (全長) (pM)	CTGF (N末領域) (pM)
  ヒト 血清	1/1	1735	952	783
  	1/2	875	495	380
  	1/4	417	237	180
  ヒト 血漿 (EDTA)	1/1	684	126	558
  	1/2	347	66.2	281
  	1/4	157	34.9 * 参考値	122

• 

[結果]
本手法で求めたCTGF(N末領域)量について、高い希釈直線性があることが確認できた。

健常者およびIPF患者の血漿におけるN末領域CTGFの測定

健常者および特発性肺線維症(IPF)患者より採取した血漿(EDTA)から、CTGF(全長＋N末領域)ELISAキットワコーとCTGF(全長) ELISAキットワコーを用いて、CTGF (全長)およびCTGF (N末領域)の量を求めた。

• 健常者
  ID	CTGF（全長＋N末領域） (pM)	CTGF（全長） (pM)	CTGF（N末領域） (pM)
  1	494	83.4	411
  2	535	116	419
  3	580	155	425
  4	661	129	532
  5	383	63.5	319
  	mean	109	421
  	SD	36.4	75.6

• IPF患者
  ID	CTGF（全長＋N末領域） (pM)	CTGF（全長） (pM)	CTGF（N末領域） (pM)
  1	1226	213	1013
  2	1004	187	817
  3	432	35.4	397
  4	1422	278	1144
  5	938	39.9	898
  6	682	73.2	609
  7	1123	168	955
  8	849	45.5	804
  9	857	60.6	796
  	mean	122.3	826
  	SD	90.3	221

[結果]
CTGF(全長)は健常者とIPF患者の間で統計的に有意な差は見られなかった。一方、IPF患者の血漿中CTGF (N末領域) 量は健常者よりも有意に高かった。

引用文献

1. Kono, M. et al.: Clin. Chim. Acta, 412, 2211(2011).
   Plasma CCN2 (connective tissue growth factor; CTGF) is a potential biomarker in idiopathic pulmonary fibrosis (IPF)
2. Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).
   Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor

使用文献

1. Kogiso, T. et al.: PLoS One, 19(1), e0296375(2024).
   Serum level of full-length connective tissue growth factor reflects liver fibrosis stage in patients with Fontan-associated liver disease
2. Morishima, N. et al.: Pract. Lab. Med., 40, e00402(2024).
   Serum levels of the N-terminal fragment of connective tissue growth factor is a novel biomarker for chronic pancreatitis