DNAエキストラクターRTISキット DNA ExtractorR TIS Kit

• 使用法１プロトコル

  

• 使用法２プロトコル^*1

  

• 
  
  
  

  使用法１は、タンパク質分解酵素処理の前にRNase処理を実施し、操作を簡略化した方法です。

  使用法２はDNAの精製度を高めるためにタンパク質分解酵素処理とRNase処理を別工程で行い、PEG沈殿法でDNAを回収する方法です。

  いずれの方法でも8-OHdG量に差は見られず、操作中のDNA酸化は同程度に抑制されています。

  
  
  

  ＊1　本プロトコルではDNAの精製度を上げることが可能です。

  ＊2　酵素反応液に析出物が見られた場合は、37℃に加温、または室温に戻し、完全に溶かした後、混ぜてから使用して下さい。

マウス肝臓からのDNA抽出及び8-OHdG量の測定

マウス肝臓(同一個体)からDNA Extractor^® WB Kit［製品コード：291-50502］及びDNA Extractor^® TIS Kit［使用法１］を使ってDNAを抽出した。

取得したDBAに対し、ヌクレアーゼP1処理を行った後、高感度8-OHdG Check［code No. 307-07921］及びHPLC/ECDによって8-OHdG量を測定し、両者を比較した。

• 高感度8-OHdG Checkによる測定

  

  DNA Extractor^® WB Kitに比べて、操作中の8-OHdG発生量を半分に抑制する事ができた。

  その結果、8-OHdG測定用DNA抽出キットとして優れた性能が示された。

• HPLC/ECDによる測定

  	8-OHdG濃度 (nmol/L)	dG濃度(μmol/L)	8-OHdG／105 dG
  DNA Extractor® WB Kit	1.41	687	0.21
  DNA Extractor® TIS Kit	0.59	692	0.08

  HPLC条件

  カラム：Wakosil-Ⅱ 5C18 RS φ 4.6mm x 150mm
  溶離液：50 mmol/L 酢酸ナトリウム(pH5.2)，9% MeOH
  流速　：1 mL/min
  吸光度：UV 260 nm
  ECD電解電位：+600mV

  DNA Extractor^® WB Kitに比べて、操作中の8-OHdG発生量を半分以下に抑制することができた。

  また、デオキシグアノシン中の8-OHdG濃度も非常に低いことが明らかになり、8-OHdG測定用のDNA抽出キットとして優れた性能が示された。