DNAエキストラクター® SPキット
DNA Extractor® SP kit
- 遺伝子研究用
-
for Genetic Research
- 製造元 :
- 富士フイルム和光純薬(株)
- 保存条件 :
- 冷蔵 (氷冷輸送)
- 適用法令 :
- PRTR-1 安衛法57条・有害物表示対象物質 有機則第2種 労57-2 優先評価物質 危4-ア(非水溶性)-II
- GHS :
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- 構造式
- ラベル
- 荷姿
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比較
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製品コード
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容量
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価格
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在庫
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50回用
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7 |
ドキュメント
キットコンポーネント
50回用(サンプル100 μL)
| 酵素反応液 | 10 mL x 1本 |
|---|---|
| タンパク分解酵素液 | 250 µL x 1本 |
| よう化ナトリウム溶液 | 15 mL x 1本 |
| アルコール液 | 30 mL x 1本 |
| 洗浄液(A) | 50 mL x 1本 |
| 洗浄液(B) | 50 mL x 1本 |
DNA抽出の原理
- タンパク質分解酵素によって血清・血漿由来のタンパク質を分解する。
- よう化ナトリウムの作用により血清・血漿由来のタンパク質及び脂質などを可溶化し、本キット添付のアルコール液により除去、DNAを沈殿させる。
プロトコル
＊1：()内は、200 μLのサンプルからスタートしたときのプロトコル。
＊2：血清(血漿)検体は、氷上で取り扱う。血清(血漿)中のDNaseが活性を持たないよう、なるべく早めに酵素反応液を添加する。
＊3：キットから取り出し、あらかじめ氷上に移してから使用する。
＊4：上清を捨て、ペーパータオルの上にチューブを逆さにして置き、チューブの口をペーパータオルに押し付けて残りの上清液をできるだけ除く。
＊5：洗浄液(A)を加えた後、－20 ℃保存で長期保存することができる。
＊6：沈殿が器壁から剥がれるまで十分に混和する。
＊7：完全に沈殿がなくなるまで溶解する。
使用例
① ヒト血清及び血漿から抽出したDNAのp53-Exon 5 領域の増幅
本キットを用いて、ヒト血清(10サンプル)及びヒト血漿(1サンプル)からDNAを抽出し、20 μLのTEバッファー(pH 8.0)に溶解したDNA試料を作製。そのうち5 μLに対してそれぞれp53-Exon 5 領域(308bp)の増幅を行った。
コントロールとしてシリカ担体(遠心ろ過法)を抽出原理としているDNA抽出キット(A社)と比較した。
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M：DNA Step Ladder Mix (80～10kbp) PCR：40サイクル |
② DNA Extractor® SP Kitを用いた、1～5 mL検体からのDNA抽出法
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TEバッファーに溶解後でも不溶性の沈殿が生じており、バックグラウンド(吸光度320 nm)に吸収が認められたため、純度が常法(100～200 μLから抽出)より低い。但し、PCRによる増幅は問題なく可能である。
NC： Negative Control
M： Markerp53-Exon 5領域(308bp)のPCR(35サイクル)試料
1 mL及び5 mLの血清から抽出したDNAのうち、10 μL血清に相当する量のDNAをPCRに供した。問題なく目的のDNA配列が増幅された。
参考文献
- Ishizawa, M. et al., Nucleic Acids Res., 22, 1774 (1994).
- Sozzi, G. et al., Clin. Cancer Res., 5, 2689 (1999).
- Silva, J. M. et al., Cancer Res., 59, 3251 (1999).
- Shao, Z. M. et al., Clin. Cancer Res., 7, 2222 (2001).
概要・使用例
| 概要 | DNA Extractor SP Kitは、血清(Serum)および血漿(Plasma)中に存在するDNA断片を効率よく抽出することができるキットです。本キットは、よう化ナトリウム(NaI)法を基本原理に採用しているので、劇物であるフェノール/クロロホルムを使用することなく、一連の操作を1本の遠心分離チューブだけで行うことができます。近年、がん細胞など疾患の原因細胞に由来する遊離DNA(plasma DNA)が血液中に浮遊していることが報告され、癌の早期診断あるいは病状のモニタリングとしての研究が進んでいます。本キットは、高いDNA回収率であるため、遊離DNA解析の前処理用試薬として有用です。 WAKO BIO WINDOW No.63,p20(2004.NOV.)、No.64,p.23(2004.DEC.)。和光純薬時報 Vol.72 No.4 p.10(2004)。 |
|---|---|
| 特長 | 1.少量(100ul)の血清や血漿サンプルから、高い回収率でDNA を取得することができます。2.よう化ナトリウム法に基づく抽出法を採用しているため、100％に近いDNA回収率です。3.フェノール、クロロホルムなどの劇物を使用していないため、安全に操作できます。4.シリカ担体などを使った固相抽出法を行わないため、担体への吸着による微量DNAのロスが生じません。5.一連の操作をすべて1本のマイクロ遠心分離チューブ内で行えるため、外来遺伝子のコンタミネーションを最低限度に抑えることができます。子のコンタミネーションを最低限度に抑えることができます。･血液サンプル由来の脂質類も特別に調製したアルコール液で完全に除去できます。･PCR阻害が認められない良質のDNA サンプルが取得できます。 |
| 使用方法 | 100μ L (200μ L) *1)血清または血漿*2) + 酵素反応溶液200u L (300μ L) + タンパク分解酵素液5uL (8-10u L) *3) ボルテックス インキュベート, 56℃ , 10分間(56℃ , 30分間) + よう化ナトリウム溶液300uL (400u L) 軽く混和 + アルコール溶液600uL (900u L) ボルテックス 室温, 10 分間12K-20K, 室温, 10 分間沈殿 *4) + 洗浄液(A) 1mL (1.5mL) *5) ボルテックス *6)12K-20K, 室温, 5 分間沈殿 *4) + 洗浄液(B) 1mL (1.5mL) ボルテックス *6)12K-20K, 室温, 5 分間沈殿 *4) 乾燥, 65℃ , 5 分間+ 10-20μLのTE(pH 8.0) またはD.W.など(10-20u L) ボルテックス *6) 溶解, 65℃ , 3-5 分間 ボルテックス *7)DNA溶液： 20℃保存*1) ( )内は、200uLのサンプルからスタートしたときのプロトコールです。*2) 血清(血漿) 検体は、氷上で取り扱って下さい。血清(血漿) 中のDNase が働きますので、なるべく早めに酵素反応液を添加して下さい。*3) キットから取り出し、予め氷上に移してから使用して下さい。*4) 上清を捨て、ペーパータオルの上にチューブを逆さにして置き、そこにチューブを押さえつけて残りの上清液をできるだけ除きます。*5) 洗浄液(A)を加えた後、?20℃保存で長期保存することができます。*6) 沈殿が器壁から剥がれるまで十分に混和して下さい。*7) 完全に沈殿がなくなるまで溶解して下さい。 |
物性情報
「物性情報」は参考情報でございます。規格値を除き、この製品の性能を保証するものではございません。
本製品の品質及び性能については、本品の製品規格書をご確認ください。
なお目的のご研究に対しましては、予備検討を行う事をお勧めします。
製造元情報
別名一覧
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