抗フィーカリバクテリウム, モノクローナル抗体 (FD-S2D3-18K1) Anti Faecalibacterium, Monoclonal Antibody (FD-S2D3-18K1)

本製品は、国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 國澤 純 先生、吉井 健 先生らによって開発されたフィーカリバクテリウム・ダンカニエ (旧名フィーカリバクテリウム・プラウスニッチ) に対するモノクローナル抗体です¹⁾。ELISA、フローサイトメトリー、免疫沈降、ウエスタンブロッティングに使用することができ、腸内細菌の迅速・簡便・安価な測定に貢献することが期待されます。

抗体情報

サンドイッチELISAによる各種腸内細菌の定量とNGS (16S rRNA遺伝子) との比較

ヒト糞便 3検体について、抗腸内細菌抗体を組み合わせたサンドイッチELISAにより菌数を測定した。またサンドイッチELISAとNGSによる16S rRNA遺伝子のアンプリコンシークエンスで得られた腸内細菌の構成比を比較した¹⁾。

腸内細菌数の測定 (サンドイッチELISA)

• Phocaeicola vulgatus
• Faecalibacterium duncaniae
• Segatella copri

NGS (16S rRNA遺伝子) との比較

• Phocaeicola vulgatus
• Faecalibacterium duncaniae
• Segatella copri

ELISA

96ウェルマイクロプレートに細菌溶液100 μLを添加し、コーティングした。細菌溶液は凍結乾燥した熱殺菌細菌をPBSで希釈する、もしくはB-PER溶液に懸濁し、ガラスビーズで破砕することで調製した。抗原固相化プレートのブロッキングおよび洗浄を行った後、ハイブリドーマ 各クローンの細胞培養上清を添加し、2時間インキュベートした。抗原に結合した抗腸内細菌抗体はHRP標識ヤギ抗マウスIgGを用いて検出した¹⁾。

• P. vulgatus
• F. duncaniae
• S. copri
• B. pseudocatenulatum
• B. longum
• B. wexlerae
• A. muciniphila

フローサイトメトリー

細菌をファーマー固定液 (エタノール:酢酸=7:3) で固定後、遠心分離 (13,040 x g, 2分, 4 °C) を行った。細菌 100 μLと抗腸内細菌抗体 1 μgを1 % BSAを含むPBS-Tに懸濁し、氷上で1時間インキュベートした。細胞を洗浄後、FITC標識抗マウスIgGを添加し、30分間、氷上、暗所で反応させた。染色された細菌を洗浄し、フローサイトメーターで解析した¹⁾。

ウエスタンブロッティング

Faecalibacterium duncaniae JCM31915を10,000 x gで5分間 遠心分離して回収後、タンパク質 2 µgをSDS-PAGEにて分離した。分離したタンパク質はPVDF膜に転写し、ブロッキング後、25-50 ng/mLの抗腸内細菌抗体およびHRP標識マウスIgGを用いて検出した¹⁾。

1. Yoshii, K. et al.: Sci. Rep., 15(1), 1(2025).
   Establishment of enterotype-specific antibodies for various diagnostic systems