ニッポンジーン GeneAce Turbo RT Kit with DNase I
GeneAce Turbo RT Kit with DNase I は、改変型M-MLV (RNase H-) 逆転写酵素により、短時間で大量のcDNAを合成できます。本キットで合成したcDNAは、RT-qPCRにおいて高い定量を示し、RT-qPCR用の鋳型として適しています。さらに、付属のDNase I で、サンプル中のゲノムDNAを簡単に除去できます。
製品概要
【特長】
- 約25分間でcDNA合成が完了 (DNase I処理時間を含む)
- 微量RNAからも安定したcDNA合成が可能
- 各種阻害物質に対する高い耐性
- リアルタイムPCR試薬 (GeneAce qPCR Mix シリーズ) との組み合わせに最適
【用途】
- RT-qPCR
製品内容
100回用 (20 µL反応系での使用回数です。)
| 構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
|---|---|---|---|
| DNase I (RNase free) | 20 µL x 1 | -20°C | |
| 14 x DN Turbo Buffer | 100 µL x 1 | -20°C | 14×DN Turbo Bufferには逆転写反応に必要な成分が含まれています。 |
| 5 x RT Turbo Buffer | 400 µL x 1 | -20°C | 5 x RT Turbo Bufferの添加によりDNase I活性が停止します。 |
| RT Turbo Primer Mix | 100 µL x 1 | -20°C | RT Turbo Primer Mix は、Random Hexamer と Oligo (dT) Primer を最適な比率で配合したプレミックスです。 |
| Turbo Enzyme Mix | 100 µL x 1 | -20°C | Turbo Enzyme Mix は、改変型 M-MLV Reverse Transcriptase および RNase Inhibitor を含有しています。 |
| ddWater (RNase free) | 1.4 mL x 1 | -20°C |
使用例
- 1. RNAサンプルからgDNAを除去
-
RNAサンプル (1 µgまで) X µL DNaseⅠ (RNase free) 0.2 µL 14× DN Turbo Buffer 1 µL ddWater (Rnase free) Total 14 µL 37℃、5 min → on ice
- 2．逆転写反応
-
1.の反応液 (RNA) X µL 5 x RT Turbo Buffer 4 µL RT Turbo Primer Mix 1 µL Turbo Enzyme Mix 1 µL Total 20 µL 25℃、5 min (プライマーアニール)
50℃、10 min (逆転写反応)
85℃、5 min (酵素失活)
- 3．合成cDNAを活用
- 例)
- リアルタイムPCRでの発現比較解析
- デジタルPCRでの絶対定量
- マイクロアレイ、RNA-Seqの前処理に
実験例1 cDNA合成量の比較
Jurkat Total RNA 10 ng または 0.1 ng を用いて各社キットでcDNAを合成した。 GeneAce SYBR™ qPCR Mix II を用いてリアルタイムqPCRを実施し、当社品を100% とする相対cDNA合成量をCt値から算出した。
【結果】
本製品は、鋳型RNA量 10 ng および 0.1 ng のいずれの条件でも、高いcDNA合成量を示した。
実験例2 阻害物質耐性
Mouse Total RNA (5 ng/µL) を鋳型に、各種阻害物質存在下で各社キットによるcDNA合成を行い、GeneAce SYBR™ qPCR Mix IIを用いてリアルタイムqPCRを実施した。本製品の阻害物質無添加条件を100%として、各条件の相対cDNA合成量をCt値から算出した。
【結果】
本製品は、複数の阻害物質存在下でも高いcDNA合成性能を維持した。特にSDS存在下では、他社品を大きく上回るcDNA合成量を示した。
実験例3 簡易抽出RNAからのcDNA合成
1. Jurkat細胞 (105, 104, 103 cells) から、Template Prepper for Cell RNA を用いてRNAを簡易抽出し、本製品でcDNAを合成した。
2. 得られたcDNAを鋳型として、GeneAce SYBR™ qPCR Mix II を用いてリアルタイムqPCRを実施した。
【結果】
簡易抽出RNAを用いた場合でも、本製品は定量性の高いcDNA合成を示した。
RT-qPCR の種類
製品一覧
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