Biotium社 ViaPlex™ 2-Color Cell Barcoding Kits

ViaPlex™ 2-Color Cell Barcoding Kits は、フローサイトメトリーで便利で柔軟な細胞バーコーディングを実現します。
細胞は、1種類の蛍光色素につき最大3つの濃度で、共有結合した蛍光色素を用いて標識されます。これにより、最大15種類の異なる細胞集団を1本のチューブにプールして、まとめて分析することが可能です。
また、複数のサンプルを1つの染色およびデータ取得ワークフローに統合することで、試薬の使用量、作業時間、および装置の稼働時間を大幅に削減します。その結果、データの品質を損なうことなく、ハイスループットフローサイトメトリーのための効率的で費用対効果の高いソリューションを実現します。

➀細胞を用意

最大15種類の異なる細胞集団を分離できます。細胞には、必要に応じて任意の処理を行うことができます。
(例：任意の薬剤やサイトカインで、任意の時間処理するなど)。

➁バーコーディングマトリックスを用意

2種類のViaPlex™色素を、3つの強度レベル (低、中、高) で使用することで、最大15通りの独自の組み合わせを作成できます。
その後、各色素の組み合わせを用いて、個々の細胞集団をそれぞれ染色します。

➂色素バーコードで細胞染色

各細胞集団を、バーコードマトリックスから調製した固有の染料バーコードで染色した後、サンプルを1本のチューブにまとめます。

➃染色用にバーコードされた細胞を分注

バーコード付きの細胞を混合した後、解析対象および適切なコントロールの染色用に、別々のチューブに等分して分注してください。
ViaPlex™ 405 および ViaPlex™ 488 と相補的な染色剤を使用してください。

⑤フローサイトメトリーで解析

15の個別のバーコード付き集団それぞれにゲートを設定して、サンプルを解析してください。
適切なチャンネルで、抗体やその他の目的の染色物を検出してください。

1本のチューブで最大15の異なる集団を分析

15種類の異なるJurkat細胞集団を15種類のバーコード色素の組み合わせで染色し、1本のチューブに混合した後、フローサイトメトリーにより解析した。X軸にV450チャネルのViaPlex™ 405、Y軸にB525チャネルのViaPlex™ 488をプロットしたドットプロットには、15種類の異なる細胞集団が示されている。各集団は、下流の解析に向けてゲート設定およびラベル付けが行われている。

実験の柔軟性

ViaPlex™ 染色処理は、細胞処理の前でも後でも行うことができるため、実験のニーズに合わせた柔軟なワークフローを実現します。

PBMCを、100 ng/mLのIL-2または200 nMのPMAによる30分間の処理の前後いずれかの段階で、ViaPlex™ 2-Color Cell Barcoding Kit (405&488) を用いてバーコード化した。バーコード化および処理後、細胞を混合し、CD3およびpERK1/2の染色を行った。これらのプロットには、各バーコード集団でゲート設定されたCD3+細胞が示されている。IL-2で処理したT細胞 (ピンク色の線のヒストグラム) は未処理の細胞 (灰色のヒストグラム) とヒストグラム形が同一であるが、PMAで処理したT細胞は高レベルのpERK1/2を示している (ピンク色で塗りつぶされたヒストグラム)。右図と左図を比較して、細胞が薬剤処理の前か後かにかかわらず、染色結果は同じであった。