Genovis社 N型糖鎖の切断・分離用スピンカラム「PNGase F Immobilized Microspin」、酵素「PNGase F」
Genovis社は、抗体医薬研究用のバイオ医薬プロセス酵素SmartEnzymes™を開発・製造しているスウェーデン(ルンド)のメーカーで、モノクローナル抗体、ADCs(antibody drug conjugates)、Fc融合タンパク質、バイオシミラー等のバイオ医薬品の研究開発に使用できるユニークな酵素(プロテアーゼ、グリコシラーゼ)、試薬キットをラインアップしています。
PNGase FはN型糖鎖切断酵素であるPeptide N-Glycosidase Fです。抗体や融合タンパク質、その他N-グリコシル化タンパク質上のN型糖鎖を切断することで、タンパク質の不均一性を低減し、切り離されたN型糖鎖の分析が可能です。
PNGase F Immobilized MicrospinはPeptide N-Glycosidase Fをアガロースビーズに共有結合させたスピンカラム製品です。スピンカラム1本で0.2mgの糖タンパク質を処理できます。
PNGase F Immobilized Denaturing Microspinにはさらに変性剤RapiGest™ SF*が添付されています。ペプチドを修飾したり、プロテアーゼ活性を抑制したりすることなく、タンパク質の酵素による切断を受けやすくします。
* RapiGest™ SFはWaters Corporationの商標です。
特長
- 短時間でN型糖鎖の脱グリコシル化が可能
(中性条件下：1h~、変性条件下：15min~) - 200ugの糖タンパク質をスピンカラムで簡便に処理
- MS解析時に酵素由来のピークが現れない
サンプルに残存するPNGase F Lyophilizedの検証
PNGase F Immobilized Microspin(ネイティブ条件)または溶液中のPNGase F Lyophilizedで処理した場合について(いずれも37℃、1時間インキュベート)、サンプルに残存するPNGase F Lyophilizedについて検証しました。
PNGase F Immobilized MicrospinまたはPNGase F LyophilizedでIgGを脱グリコシル化ののち、IgGプロテアーゼFabRICATORで消化し、還元したサンプルを逆走LC-MSで分析しました。 溶液中のPNGase F Lyophilizedで処理した場合と異なり、PNGase F Immobilized Microspinで処理した場合はPNGase F Lyophilizedが固相化されているため、サンプル中にPNGase F Lyophilizedが存在しないことが確認できました。
上図：PNGase Fで処理されたIgGのFc/2フラグメントのTICクロマトグラム
下図：PNGase Fで処理されたIgGのFc/2フラグメントの質量スペクトル
PNGase F Immobilized Denaturing Microspinを用いたN型糖鎖の迅速な切断
グリコシル化部位によってはPNGaseFが反応しにくく、脱グリコシル化反応が遅くなる、または立体障害による阻害が起こります。変性条件下での反応速度の検証のため、PNGase F Immobilized Microspin (ネイティブ条件)およびPNGase F Immobilized Denaturing Microspin (変性条件)を用いて糖タンパク質を処理し、MS解析を行いました。
ネイティブ条件では添加剤や温度を上げることなくN型糖鎖を除去することができましたが、完全な脱グリコシル化には18時間のインキュベーションが必要でした。一方、変性条件では30分でN型糖鎖の除去が可能でした。
MSスペクトルより、O型糖鎖はそのままにすべてのN型糖鎖を除去できたことがわかります。 インタクトなタンパク質の分析は複雑ですが、PNGase F Immobilized Microspin での処理後、サンプルの複雑さを大幅に低減することができました。
製品一覧
- 項目をすべて開く
- 項目をすべて閉じる
PNGase F Immobilized Microspin
PNGase F Immobilized Denaturing Microspin
PNGase F Lyophilized
- 掲載内容は本記事掲載時点の情報です。仕様変更などにより製品内容と実際のイメージが異なる場合があります。
- 掲載されている製品について
- 【試薬】
- 試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
- 製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
- 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
- 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。