アディポネクチン ELISAキット
アディポネクチンは脂肪細胞から分泌されるサイトカイン、すなわちadipocytokine(adipokine)のひとつで脂肪代謝とインスリン感受性を制御し、抗糖尿病、抗アテローム(抗粥状硬化症)、抗炎症性作用を示す重要な物質です。血中アディポネクチンは、単量体が集合して3量体、6量体あるいは12-18量体を形成しています。3量体(LMW)は、コラーゲン領域にある三重鎖へリックスの非共有結合相互作用と球状C1qドメインにある疎水性交互作用によって形成されます。3量体が集まって6量体(MMW)やもっと大きな複合体(HMW)を形成します。Adiponectinはさまざまな成長因子と明瞭な親和性で結合し、隔離することで細胞の成長と血管新生、組織の再構成に影響を及ぼすとされています。血中HMWの測定値は、トータルアディポネクチンよりもBMIや性別、体重減少の影響、グルコース・トレランス、肝臓のインスリン感受性、メタボリック症候群や2型糖尿病をより明確に反映するとされています。従って、HMWの測定はトータルアディポネクチンを測定するより、メタボリック症候群やDM2の解析により役に立つことが期待されます。
特長
- 検量線範囲：3.13 ng/mL～200 ng/mL
※78.25～5000 ng/mL(検体25倍希釈時)
※0.1565～10 μg/mL(検体50倍希釈時) - 短時間で測定可能(反応時間：4時間)
- 微量検体で測定可能(希釈検体 50 µL, 希釈目安 25 ～ 50倍)
- 全ての試薬が溶液タイプで即座に使用可能
- 高い精度と再現性
キット構成
| 構成品 | 状態 | 容量 |
|---|---|---|
| (A) 抗体固相化 96 ウェルプレート (B) 標準溶液(2000 ng/mL) (C) 緩衝液 (D) HRP標識抗アディポネクチン抗体 (F) 発色液(TMB) (H) 反応停止液(1M H2SO4) (I) 濃縮洗浄液(10×) プレートシール 取扱説明書 |
洗浄後使用 希釈後使用 そのまま使用 希釈後使用 そのまま使用 そのまま使用 希釈後使用 |
96 wells(8×12) / 1 枚 200 μL / 1 本 60 mL / 1 本 100 μL / 1 本 12 mL / 1 本 12 mL / 1 本 100 mL / 1 本 3 枚 1 部 |
交差反応性
| 動物種 | 対象物質 | 反応性および反応率(％) |
|---|---|---|
| Mouse | Adiponectin(HMW) | 100 |
| Adiponectin(Hexamer) | ＜ 5 | |
| Adiponectin(Trimer) | 交差反応性なし | |
| Adiponectin(Monomer) | 交差反応性なし | |
| MCH | 交差反応性なし | |
| TNF-α | 交差反応性なし | |
| IFN-γ | 交差反応性なし | |
| Insulin | 交差反応性なし | |
| Leptin | 交差反応性なし | |
| Rat | Adiponectin(HMW) | 100 |
| Adiponectin(Monomer) | 交差反応性なし | |
| TNF-α | 交差反応性なし | |
| IFN-γ | 交差反応性なし | |
| Insulin | 交差反応性なし | |
| Leptin | 交差反応性なし |
※交差率は、1000 ng/mL濃度時
操作法・標準曲線例
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操作法
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標準曲線例
※プレートリーダーはSafire2/TECANを使用
※吸光度は測定環境により変動します
※演算処理は3次元項式を使用
測定例
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マウス／ラット検体高分子アディポネクチン測定結果
検体：血清，採血時の絶食なし、 採血時の麻酔：イソフルラン、
採血部位：心臓(KKAY/Taは腹大動脈) 、 飼育条件：KKAy/Taのみ単独飼育動物種 系統 週齢 雄雌 測定値 標準偏差 検体数 Mouse BALB/c 6w オス 2369 743 10 ICR 6w オス 2119 802 10 BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/ 12w オス 1802 875 10 KKAy/Ta 12w オス 2141 937 16 B6.V-Kepob 12w オス 1229 437 10 Rat CD(SD) 8w オス 3220 670 9 GK 12w オス 3512 304 10 ZUC-Leprfa 8w オス 1991 1120 10 単位：ng/mL，2重測定
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マウス雌雄別高分子アディポネクチン測定結果
検体：血清、 麻酔：イソフルラン、 採血部位：心臓採血,採血時の絶食:24時間、
飼料：通常飼料CRF-1、 飼育条件:群飼育
Mean±SE **P＜0.01
マウス投薬試験結果の一例
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スケジュール
Day -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 薬剤/生食投与 採血 高脂肪食 マウス：KKAy/Ta, オス, 7W, 6匹/群
飼料 ：高脂肪食(20 %大豆油添加CE-2)
試験群：ビオグリタゾン, 10 mg/10 mL/kg
対象群：生理食塩水, 10 mL/kg 
Pre ：n＝12 * P＜0.05 vs Pre
対象群：n＝6 **P＜0.01 vs Pre
試験群：n＝6
採血 ：午後
バリデーションデータ
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精度試験(アッセイ内変動)
検体 A B 1 29.5 129 2 30.7 125 3 29.8 128 4 29.0 126 5 29.6 126 mean 29.7 127 SD 0.631 1.89 CV(％) 2.12 1.49 単位：ng/mL
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再現性試験(アッセイ間変動)
測定日/検体 C D E 0日目 196 126 62.5 1日目 192 130 59.1 2日目 196 125 60.7 3日目 190 125 60.3 mean 196 127 60.7 SD 2.63 2.27 1.41 CV(％) 1.36 1.79 2.33 単位：ng/mL n=2
添加回収試験
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検体H
添加量 実測値 回収量 回収率(％) 0 68.5 - - 35.0 103 34.5 98.6 65.0 132 63.5 97.7 95.0 165 96.9 102 単位：pmol/mL n=2
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検体I
添加量 実測値 回収量 回収率(％) 0 23.3 - - 18.0 40.3 17.0 94.4 26.0 50.6 27.3 105 32.0 55.5 32.2 101 単位：ng/mL n=2
希釈直線性試験
2血清検体を連続的に希釈用緩衝液で3段階希釈し測定した結果、直線回帰のR2は0.9987から0.9993でした。
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アディポネクチン(高分子) ELISAキット
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- 【医薬品原料】
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