TDAR(T cell Dependent Antibody Responce)

医薬品の免疫毒性試験に関するガイドラインICH S8 では、免疫毒性の標的が特定されていない場合には T 細胞依存性抗体産生試験(TDAR、T cell Dependent Antibody Reaction)が推奨されています。TDAR はT 細胞依存性抗原とされている、たとえば KLH (Keyhole limpet hemocyanin)を投与して一次抗原刺激によるIgM 性抗体の産生、更に二次抗原刺激後のクラス・スイッチによるIgG 性抗体の産生を観察します。富士フイルムワコーシバヤギではラット用の抗KLH-IgG抗体価、抗 KLH-IgM抗体価を測定するELISAキットをラインアップしています。また、サル用の抗KLH-IgG抗体価、抗 KLH-IgM抗体価もご用意しております。サル用についてはお問い合わせください。

特長
キットの構成
交差性
操作法・標準曲線例
バリデーションデータ
KLH投与試験データ
製品一覧
関連情報

特長

ラット-IgG特長
- 短時間(全反応時間：2時間20分)で測定可能
- 測定範囲：0.47～30 ng/mL(検量線範囲)
- 微量な検体(希釈検体: 50 μL/ウェル)で測定可能
  ※非特異反応を回避するため、検体は500倍以上希釈
- 環境に優しい防腐剤を使用
- 全ての試薬が溶液タイプで即座に使用可能
- 高い測定精度と再現性
ラット-IgM特長
- 短時間(全反応時間：2時間20分)で測定可能
- 測定範囲：3.13～200 ng/mL(検量線範囲)
- 微量な検体(希釈検体: 50 μL/ウェル)で測定可能
  ※非特異反応を回避する為，検体は200倍以上希釈
- 環境に優しい防腐剤を使用
- 全ての試薬が溶液タイプで即座に使用可能
- 高い測定精度と再現性

キットの構成

ラット-IgGキット

構成品	状態	容量
(A) KLH固相化 96 ウエルプレート	洗浄後使用	96 wells(8 x 12) / 1 枚
(B) 抗KLHラットIgG標準溶液(300 ng/mL)	希釈後使用	200 µL / 1本
(C) 緩衝液	そのまま使用	100 mL / 1本
(D) HRP結合抗ラットIgG抗体	希釈後使用</td.	100 µL / 1本
(F) 発色液(TMB)	そのまま使用	12 mL / 1本
(H) 反応停止液 (1M H₂SO₄) ※取扱注意	そのまま使用	12 mL / 1本
(I) 濃縮洗浄液 (10 x)	希釈後使用	100 mL / 1本
プレートシール		3 枚
取扱説明書		1部

ラット-IgMキット

構成品	状態	容量
(A) KLH固相化 96 ウエルプレート	洗浄後使用	96 wells (8 x 12) / 1 枚
(B) 抗KLHラットIgM標準溶液 (1000 ng/mL)	洗浄後使用	200 µL / 1本
(C) 緩衝液	そのまま使用	100 mL / 1本
(D) HRP結合抗ラットIgM抗体	希釈後使用	100 µL / 1本
(F) 発色液(TMB)	そのまま使用	12 mL / 1本
(H) 反応停止液 (1M H₂SO₄) ※取扱注意	そのまま使用	12 mL / 1本
(I) 濃縮洗浄液 (10 x)	希釈後使用	100 mL / 1本
プレートシール		3 枚
取扱説明書		1部

交差性

ラット-IgGキット

※交差率は、3000 ng/mL濃度時のデータ

動物種対象物質反応性および反応率(%)

Rat IgG 100

IgM ー

IgA ー

IgE ー

Mouse IgG ー

IgM ー

IgE ー

ー : 交差反応性なし
ラット-IgMキット

※交差率は、2000 ng/mL濃度時のデータ

動物種対象物質反応性および反応率(%)

Rat IgM 100

IgG ー

IgA ー

IgE ー

Mouse IgG ー

IgM ー

IgE ー

ー : 交差反応性なし

動物種	対象物質	反応性および反応率(%)
Rat	IgG	100
IgM	ー
IgA	ー
IgE	ー
Mouse	IgG	ー
IgM	ー
IgE	ー

動物種	対象物質	反応性および反応率(%)
Rat	IgM	100
IgG	ー
IgA	ー
IgE	ー
Mouse	IgG	ー
IgM	ー
IgE	ー

操作法・標準曲線例

操作法(ラット-IgG、ラットIgM共通)

KLH固相化96ウェルプレート
↓　洗浄3回^※
希釈検体または抗KLHラットIgG or IgM標準溶液　50 µL
↓　撹拌^※※、室温、1時間静置反応、洗浄3回^※
HRP結合抗ラットIgG抗体　50 µL
↓　撹拌^※※、室温、1時間静置反応、洗浄3回^※
発色液(TMB)　50 µL
↓　撹拌^※※、室温、20分間静置反応
反応停止液 (1M H₂SO₄)　50 µL
↓　撹拌^※※
吸光度測定 (主波長 450 nm、副波長 620 nm)
室温：20～25℃

※洗浄液量目安：300 µL / well x 3回
※※撹拌目安：800 rpm - 10秒間 x 3回
ラット-IgGキット標準曲線例
- プレートリーダーはSUNRISE RAINBOW (TECAN) を使用
- 吸光度は測定環境により変動します
- 演算処理は三次多項式を使用
ラット-IgMキット標準曲線例
- プレートリーダーはSUNRISE RAINBOW (TECAN) を使用
- 吸光度は測定環境により変動します
- 演算処理は三次多項式を使用

バリデーションデータ

ラットIgG

ラット-IgG精度試験(アッセイ内変動)

検体 A B

1 11.2 3.93

2 11.0 3.74

3 11.3 3.83

4 11.1 3.70

5 11.5 3.99

mean 11.2 3.84

SD 0.190 0.121

CV (%) 1.7 3.2

単位：ng/mL

検体	A	B
1	11.2	3.93
2	11.0	3.74
3	11.3	3.83
4	11.1	3.70
5	11.5	3.99
mean	11.2	3.84
SD	0.190	0.121
CV (%)	1.7	3.2

ラット-IgG再現性試験(アッセイ間変動)

検体/測定日	E	F	G
0日目	15.3	3.84	0.969
1日目	15.3	3.84	0.954
2日目	15.4	3.83	0.958
3日目	15.2	3.82	0.976
mean	15.3	3.83	0.965
SD	0.0615	0.0067	0.0102
CV (%)	0.40	0.18	1.1

単位：ng/mL, n = 4

ラット-IgG添加回収試験

検体C

添加量測定値回収量回収率(%)

0.00 1.18 ーー

0.466 1.65 0.470 101

1.40 2.53 1.35 96.4

2.33 3.48 2.30 98.7

単位：ng/mL、n=2
検体D

添加量測定値回収量回収率(%)

0.00 12.5 ーー

4.90 17.2 4.70 95.9

10.7 23.1 10.6 99.1

15.4 27.2 14.7 95.5

単位：ng/mL、n=2

添加量	測定値	回収量	回収率(%)
0.00	1.18	ー	ー
0.466	1.65	0.470	101
1.40	2.53	1.35	96.4
2.33	3.48	2.30	98.7

添加量	測定値	回収量	回収率(%)
0.00	12.5	ー	ー
4.90	17.2	4.70	95.9
10.7	23.1	10.6	99.1
15.4	27.2	14.7	95.5

ラット-IgG希釈直線性試験

2血清検体を連続的に希釈用緩衝液で3段階希釈し測定した結果、直線回帰のR²は0.9992から0.9998でした。

ラットIgM

ラット-IgM精度試験(アッセイ内変動)

検体 H I

1 49.5 164

2 47.7 166

3 48.0 164

4 47.6 161

5 49.7 169

mean 48.5 165

SD 1.03 2.93

CV (%) 2.1 1.8

単位：ng/mL
ラット-IgM再現性試験(アッセイ間変動)

検体/測定日 J K L

0日目 11.1 86.5 187

1日目 11.1 86.1 188

2日目 11.2 86.3 188

3日目 11.1 83.3 186

mean 11.1 85.6 187

SD 0.0576 1.48 0.814

CV (%) 0.52 1.7 0.44

単位：ng/mL, n = 4

検体	H	I
1	49.5	164
2	47.7	166
3	48.0	164
4	47.6	161
5	49.7	169
mean	48.5	165
SD	1.03	2.93
CV (%)	2.1	1.8

検体/測定日	J	K	L
0日目	11.1	86.5	187
1日目	11.1	86.1	188
2日目	11.2	86.3	188
3日目	11.1	83.3	186
mean	11.1	85.6	187
SD	0.0576	1.48	0.814
CV (%)	0.52	1.7	0.44

ラット-IgM添加回収試験

検体M

添加量測定値回収量回収率(%)

0.00 47.3 ーー

102 144 96.7 94.8

127 172 125 98.4

140 182 135 96.4

単位：ng/mL、n=2
検体N

添加量測定値回収量回収率(%)

0.00 34.8 ーー

16.8 51.9 17.1 102

25.2 59.5 24.7 98.0

42.0 76.7 41.9 99.8

単位：ng/mL、n=2

添加量	測定値	回収量	回収率(%)
0.00	47.3	ー	ー
102	144	96.7	94.8
127	172	125	98.4
140	182	135	96.4

添加量	測定値	回収量	回収率(%)
0.00	34.8	ー	ー
16.8	51.9	17.1	102
25.2	59.5	24.7	98.0
42.0	76.7	41.9	99.8

KLH投与試験データ

検体：CD(SD)ラット　4匹　8w ♀
KLH：Cat No.374813(Calbiochem)　生理食塩水に溶解し1 mg/mLとした

IgMタイプ　抗KLH-IgM測定値

Animals Preimmunization
Day 0 (採血１) Day 19 (採血２) Dau 33 (採血４)

1 <0.626 11.2 189

2 <0.626 57.1 145

3 <0.626 29.8 172

4 <0.626 14.5 111

希釈率 200倍 2000倍 2000倍

単位：μg/mL、n=2
IgGタイプ　抗KLH-IgM測定値

Animals Preimmunization
Day 0 (採血１) Day 28 (採血３) Day 33 (採血４)

1 <0.235 276 428

2 <0.235 296 459

3 <0.235 268 364

4 <0.235 225 633

希釈率 500倍 50000倍 50000倍

単位：μg/mL、n=2

Animals	Preimmunization Day 0 (採血１)	Day 19 (採血２)	Dau 33 (採血４)
1	<0.626	11.2	189
2	<0.626	57.1	145
3	<0.626	29.8	172
4	<0.626	14.5	111
希釈率	200倍	2000倍	2000倍

Animals	Preimmunization Day 0 (採血１)	Day 28 (採血３)	Day 33 (採血４)
1	<0.235	276	428
2	<0.235	296	459
3	<0.235	268	364
4	<0.235	225	633
希釈率	500倍	50000倍	50000倍

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掲載されている製品について

【試薬】

試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。

試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。

【医薬品原料】

製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
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TDAR(T cell Dependent Antibody Responce)

特長

ラット-IgG特長

ラット-IgM特長

キットの構成

ラット-IgGキット

ラット-IgMキット

交差性

ラット-IgGキット

ラット-IgMキット

操作法・標準曲線例

操作法(ラット-IgG、ラットIgM共通)

ラット-IgGキット標準曲線例

ラット-IgMキット標準曲線例

バリデーションデータ

ラットIgG

ラット-IgG精度試験(アッセイ内変動)

ラット-IgG再現性試験(アッセイ間変動)

ラット-IgG添加回収試験

ラット-IgG希釈直線性試験

ラットIgM

ラット-IgM精度試験(アッセイ内変動)

ラット-IgM再現性試験(アッセイ間変動)

ラット-IgM添加回収試験

KLH投与試験データ

IgMタイプ 抗KLH-IgM測定値

IgGタイプ 抗KLH-IgM測定値

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IgMタイプ　抗KLH-IgM測定値

IgGタイプ　抗KLH-IgM測定値