α-グルコシダーゼ活性阻害測定キット

試　薬　名	容　量	数　量	主　成　分
酵素剤※	1 mL	2	α-グルコシダーゼ
緩衝剤	50 mL用	2	マレイン酸/マレイン酸二ナトリウム
基質1	20 mL用	2	D-(+)-マルトース
基質2	20 mL用	2	スクロース
ポジティブコントロール	100 mg	1	アカルボース

※ 凝集物が認められることがありますが、品質には問題ありません。取扱説明書の手順に従ってご使用ください。

キット以外に必要な器具・器材

• ラボアッセイ™グルコース
• 96ウエルの透明マイクロプレート
• プレートリーダー(505 nm吸光フィルター)
• マイクロピペット
• 恒温槽(37℃)

Ⅰ.試薬の調製

※希釈倍率は予備試験の結果で設定 (例：マルトース用10倍希釈、スクロース用2.5倍希釈)

＜希釈倍率決定のための予備試験＞

	マルトース	スクロース
基質液	マルトース溶液 50 μL	スクロース溶液 50 μL
精製水	25 μL
37℃で3分間加温
酵素	酵素希釈液25 μL (例: 5, 10, 20倍希釈液)	酵素希釈液25 μL (例: 1 (原液), 2.5, 5倍希釈液)
攪拌後37℃で正確に30分間反応
精製水	400 μL
ただちに沸騰水浴中で3分間加熱後、氷冷

＜グルコース定量＞

① 96ウエルマイクロプレートに酵素反応液及び希釈したグルコース標準液 (濃度: 15, 10, 5, 2.5 mg/dL) 100 μLを分注し、
　ラボアッセイ™ グルコースの発色液150 μLを添加してよく混合する。
② 37℃で10分間加温後、波長505 nmにおける吸光度を測定する。
③ 生成グルコース量がマルトース用は10 mg/dL、スクロース用は5 mg/dLになるように希釈倍率を求める。

注: 分析サンプル調製方法詳細は商品添付の取扱説明書を、グルコース定量法の詳細は別売りのラボアッセイ™ グルコースに添付の取扱い説明書をご確認ください。

Ⅱ. 本試験 (酵素反応)

＜サンプル調製＞

	マルトース	スクロース
基質液	マルトース溶液 50 μL	スクロース溶液 50 μL
試料溶液又は ポジティブコントロール溶液 (対照には精製水)	25 μL
37℃で3分間加温
酵素希釈液	酵素希釈液25 μL (予備試験で決定した希釈倍率)	酵素希釈液25 μL (予備試験で決定した希釈倍率)
攪拌後37℃で正確に30分間反応
精製水	400 μL
ただちに沸騰水浴中で3分間加熱後、氷冷

＜ブランク調製＞

	マルトース	スクロース
基質液	マルトース溶液 50 μL	スクロース溶液 50 μL
試料溶液又は精製水	25 μL
精製水	400 μL
酵素希釈液	酵素希釈液25 μL (予備試験で決定した希釈倍率)	酵素希釈液25 μL (予備試験で決定した希釈倍率)
ただちに沸騰水浴中で3分間加熱後、氷冷

Ⅲ. グルコース定量

予備試験と同様にラボアッセイ™ グルコースにて実施する。

Ⅳ. IC₅₀算出

① 対照溶液のグルコース生成量をα-グルコシダーゼ活性100％とし、各濃度の試料溶液のグルコース生成量から比活性を求める。
② 片対数グラフの横軸に試料又はポジティブコントロール濃度(酵素反応液中での終濃度)、縦軸にα-グルコシダーゼ比活性をプロットし、
　近似曲線から比活性50％の時の試料濃度(IC₅₀ 値)を算出する。