DNA Extractor^® 키트 시리즈

혈청 내 바이러스 DNA 및 생물학적 제제 내 극미량의 곰팡이 유래 DNA 추출

• 혈청에서 추출

  
  
  　
  　　Operation time: 1 to 1.5 hours
  　　Sample amount: 100 μL/test

• 이 키트는 요오드화나트륨법을 사용하여 생물학적 성분에 잔류하는 숙주 세포 유래 잔류 DNA를 추출하는 데 사용하도록 고안되었습니다. 추출된 DNA는 qPCR을 통해 정량할 수 있습니다. CHO 세포, 대장균, 효모와 같은 숙주 세포 유래 DNA의 양을 검사하고 관리하려면 DNA Extractor^® 키트를 사용하십시오. 이 키트를 사용하여 추출한 모든 종의 DNA는 Molecular Devices, LLC에서 제공하는 Threshold Immunoassay System^®에 사용하기에 적합합니다. 또한 이 키트는 혈청에서 DNA를 추출하는 데에도 사용할 수 있습니다.
  
  

  주요 기능

  • 미량 DNA(100-1,000 fg)의 효율적인 회수
  • 단일 튜브에서 전체 과정을 수행
  • 60-90분 내 추출 완료
  • 단백질 농도가 높은 시료에 대한 전처리 프로토콜
  • 요오드화나트륨법* 채택

  *요오드화나트륨법은 미국약전(USP) 42-NF37, <509> 잔류 DNA 검사에 기술된 잔류 DNA 추출 기법입니다.

  
  
  

  Kit Contents [50 tests (sample 500 μL)]

  1. Sodium Iodide Solution.......................................................2 x 26 mL
  2. Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution................................1 x 1.2 mL
  3. Washing Solution (A)..........................................................1 x 42 mL
  4. Washing Solution (B) .........................................................2 x 40 mL
  5. Glycogen Solution ............................................................1 x 0.1 mL

DNA 추출 원리

i. 계면활성제에 의해 세포막과 세포질이 파괴되어 세포핵이 분리됩니다.
ii. 프로테아제에 의해 핵막과 핵 단백질이 분해되어 DNA가 노출됩니다.
iii. 요오드화나트륨의 작용으로 단백질과 지질이 용해되고, 이소프로판올을 사용하여 DNA를 침전시킵니다.

DNA Extractor^® 키트 데이터

CHO 세포 유래 DNA 회수 시험

목적:
배양 상청액에서 CHO 세포 유래 DNA의 수율을 확인하기 위함.

방법:
본 키트를 사용하여, 10 fg에서 1 ng의 CHO 세포 유래 DNA를 첨가한 PANC-1 세포 배양 상청액에서 DNA를 추출했습니다. 그런 다음 추출된 DNA를 사용하여 qPCR 분석을 수행하여 Cq 값을 구했습니다.
또한 DNA 추출 과정 없이 정제수에 CHO 세포 유래 DNA를 첨가한 경우(표준 조건)에 대해서도 qPCR을 수행하여 Cq 값을 산출했습니다. 각 조건 하에서의 DNA 수율은 표준 조건의 결과로부터 생성된 교정 곡선을 기반으로 계산되었습니다.

시료:
1. CHO 세포 유래 DNA가 포함된 정제수 (DNA 추출 없음): 표준 조건
2. 키트를 사용하여 CHO 세포 유래 DNA가 포함된 PANC-1 세포 배양 상청액에서 DNA를 추출함.

qPCR 시약:
・GeneAce SYBR^® qPCR Mix α No ROX (Nippon Gene#319-07703)
・0.2 mL 튜브 스트립/플레이트용 Optical Flat 8–Cap Strips (BIO-RAD#TCS0803)
・Hard-Shell^® 얇은 벽 96-웰 PCR 플레이트 (BIO-RAD#HSP9601)

결과:

ND: Not detected

이 시험은 매뉴얼에 명시된 프로토콜 #2에 따라 수행되었습니다.

R대장균 유래 DNA의 회수 시험

목적:
대장균 유래 DNA의 수율을 조사하기 위함이다.

방법:
대장균 유래 DNA(10 fg ~ 1 ng)를 정제수에 첨가하고, 키트를 사용하여 DNA 추출 전후의 Cq 값을 측정하였다. DNA 추출 전 시료의 평균 Cq 값을 바탕으로 교정 곡선을 작성하여 추출 후 수율을 계산하였다.

시료:
대장균 유래 DNA가 포함된 정제수

qPCR reagents:
・GeneAce SYBR^® qPCR Mix α No ROX (Nippon Gene#319-07703)
・Optical Flat 8–Cap Strips for 0.2 mL tube strips/Plates (BIO-RAD#TCS0803)
・Hard-Shell® thin-wall 96-well PCR plates (BIO-RAD#HSP9601)

Results:

이 시험은 매뉴얼에 명시된 프로토콜 #1에 따라 수행되었습니다.

DNA Extractor^® 키트 사용 예시

Reference

Ishizawa, M. et al., Nucleic Acids Res., 19, 5792 (1991).

인간 전혈 샘플로부터의 게놈 DNA 추출
소/말 혈액, 배양 세포 및 조직으로부터의 추출도 가능합니다

• 
  　
  Operation time: 1.5 hours
  Sample amount: 500 μL/test

• 인간 게놈 유전자 분석을 위해서는 고분자량 게놈 DNA를 준비해야 합니다. 현재 다양한 종류의 게놈 DNA 추출 방법이 사용되고 있지만, 대부분 페놀과 같은 유기 용매를 사용합니다. 이러한 방법의 단점은 독성이 있으며, 추출 절차에 시간과 노력이 많이 소요된다는 점입니다.
  본 키트는 주로 인간 전혈에서 게놈 DNA를 추출하기 위해 고안되었습니다. 유해한 페놀과 클로로포름을 사용하지 않고도 단시간 내에 단일 튜브에서 고순도의 DNA를 높은 수율로 얻을 수 있습니다.
  
  

  특징

  • 90% 이상의 고분자 DNA 수율
  • 전체 과정이 약 1.5시간 내에 단일 튜브에서 완료됩니다.
  • 페놀 및 클로로포름과 같은 유기 용매가 필요하지 않습니다.
  • 인간 전혈은 물론 소/말 혈액, 배양 세포 및 조직에서도 추출이 가능합니다.
  • 페놀/클로로포름 추출법보다 조작이 간편하며, 다수의 시료를 처리하는 데 적합합니다.
  • 전체 절차가 단일 튜브 내에서 수행되므로, 조작 시 발생하는 기계적 절단으로 인한 게놈 DNA 손상을 줄여줍니다.

  
  
  

  Kit Contents [50 tests (sample 500 μL)]

  . Lysis solution................................................................65 mL × 2
  2. Enzyme reaction solution................................................10 mL × 1
  3. Sodium iodide solution.....................................................15 mL × 1
  4. Washing solution (A) ........................................................50 mL × 1
  5. Washing solution (B) ........................................................50 mL × 1
  6. Protease..............................................................................10 mg × 1

DNA 추출 원리

i. 계면활성제에 의해 세포막과 세포질이 파괴되어 세포핵이 분리된다.
ii. 프로테아제에 의해 핵막과 핵 단백질이 분해되어 DNA가 노출된다.
iii. 요오드화나트륨의 작용으로 단백질과 지질이 용해되고, 이소프로판올을 사용하여 DNA를 침전시킨다.

DNA Extractor^® WB Kit Data

DNA Extractor^® WB 키트 사용 예시

Reference

Wang, L. et al., Nucleic Acids Res., 22, 1774 (1994).

Genomic DNA extraction from cow/horse whole blood

표준 프로토콜을 부분적으로 수정하면 소 및 말의 전혈에서 고순도 게놈 DNA를 효율적으로 추출할 수 있다. 말 혈액의 경우 프로테아제 처리를 2시간 동안 수행하는 반면, 소 혈액의 경우 용해 용액으로 세척 과정을 4회 반복한 후 프로테아제 처리를 4시간 동안 수행한다.
작업 시간은 말 혈액의 경우 약 3시간, 소 혈액의 경우 약 5시간이다.
사용된 혈액 시료에는 항응고제로 EDTA·2Na 또는 헤파린이 첨가되었다.

• 

• 작업 절차

  말 혈액에서 추출

  프로테아제 처리는 핵 침전물이 사라질 때까지 2시간 동안 수행합니다.
  이 단계만 제외하고는 표준 프로토콜을 따르십시오.

  소 혈액에서 추출

  이 과정은 세포핵을 분리하고 용해 용액을 첨가하여 세척하는 것으로, 프로토콜에 명시된 대로 2회만 수행해서는 헤모글로빈과 같은 이물질을 제거하기 어렵기 때문에 4~5회 반복합니다. 참고로, 붉은색 펠릿이 투명해질 때까지 진행합니다.
  원심분리 후의 펠릿은 쉽게 부서지므로, 상층액을 제거할 때 각별한 주의가 필요합니다.
  또한, 프로테아제 처리를 약 4시간 동안 수행하십시오.

  소와 말에서 추출한 게놈 DNA의 수율 및 순도

  Sample	DNA yield (μg/mL blood)	A260/A280
  Horse (EDTA·2Na)	56.62	1.91
  Horse (Heparin)	48.34	1.88
  Cow (EDTA·2Na)	22.04	1.86

  Notes) Each horse blood sample was collected from different horses.

DNA extraction from tissues

표준 프로토콜에 2~3단계의 간단한 과정을 추가하면 조직에서 게놈 DNA를 추출할 수 있습니다. 이 과정은 약 2시간이면 완료됩니다.
추출된 DNA는 RNA나 단백질 오염이 거의 없어, 제한 효소 처리, PCR, 서던 블로팅 분석, 지문 분석 등에 사용할 수 있습니다.

Q&A for DNA Extractor^® WB Kit

Q1. DNA Extractor® WB 키트의 작동 원리는 무엇인가요?

이 키트는 전혈 및 배양 세포에서 게놈 DNA를 추출하기 위한 것입니다. 먼저 계면활성제가 포함된 용해 용액을 첨가하여 세포핵만을 분리합니다. 다음으로, 프로테아제를 사용하여 핵막과 이물질을 분해함으로써 DNA를 방출시킵니다. 그 후, 요오드화나트륨으로 단백질을 용해시킨 뒤, 이소프로판올을 첨가하여 게놈 DNA만을 침전시켜 회수합니다. 또한, 이 방법을 사용하면 DNA 추출 전 과정을 단일 튜브 내에서 수행할 수 있습니다.

Q2. RNA로 오염되지 않나요?

전혈에서 추출할 때는 RNA 오염이 드물지만, 배양 세포에서는 어느 정도 RNA가 혼입될 수 있습니다. 이 경우, 기본 프로토콜에 37°C에서 10분간 RNase 처리를 추가하면 RNA를 거의 완전히 제거할 수 있습니다.

Q3. DNA 수율이 낮습니다. 왜 그런가요?

다음은 가능한 원인입니다.
1. 첫 번째 원심분리 작업
10,000 × g에서 20초간 원심분리할 경우, 원심분리기가 완전히 10,000 × g에 도달한 후 20초간 원심분리를 수행하십시오. 원심분리기 시작 버튼을 누른 후 20초 내에는 세포핵이 완전히 분리되지 않으므로, DNA 수율이 20~30% 정도 떨어질 수 있습니다. 원심분리기 모델에 따라 차이는 있지만, 탁상용 원심분리기의 경우 10,000 × g는 약 12,000 rpm에 해당합니다.
2. 원심분리 후 상층액 제거 작업
모든 작업은 경사 분리(decantation) 방식으로 수행하십시오. 피펫을 사용하여 제거할 경우 DNA 수율이 낮아질 수 있습니다.
3. DNA 용해
고농도의 DNA가 추출되면 TE 버퍼(100~200 μL)를 첨가하고 실온에서 3시간 또는 4°C에서 하룻밤 동안 천천히 용해시킵니다. DNA는 단시간 내에 완전히 용해되지 않아 수율이 낮게 보일 수 있습니다.

Q4. 100 μL의 혈액에서 DNA를 추출할 수 있습니까?

예. 이 경우 표준 프로토콜을 축소하여 사용하십시오. 또한, 혈액량이 100 μL 이하일 경우 생리식염수를 추가하여 100 μL가 되도록 한 후 동일한 절차를 수행하십시오. 100 μL의 혈액에 대해 1개의 키트로 250회 검사를 수행할 수 있습니다.

Q5. EDTA 대신 헤파린을 항응고제로 사용하여 DNA를 추출할 수 있습니까?

일반적인 헤파린 농도(혈액 1mL당 10 단위) 이하에서는 DNA를 성공적으로 추출할 수 있지만, 약 20 단위/mL 이상의 농도에서는 수율이 현저히 떨어집니다. 또한, 헤파린이 첨가된 혈액에서 추출한 DNA는 제한 효소 처리나 PCR 반응에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 EDTA·2Na 또는 EDTA·2K(혈액 1 mg/mL)의 사용을 권장합니다.

Q6. 보관된 혈액에서 DNA를 추출할 수 있습니까?

혈액을 4°C에서 3주 이하로 보관한 경우 DNA를 성공적으로 추출할 수 있습니다. 그러나 1개월 이상의 장기 보관 시 DNA는 점차 분해됩니다. 장기 보관 시 혈액은 냉동 보관해야 합니다.

Q7. 마이크로튜브 믹서가 없을 때는 어떻게 해야 하나요?

시료를 뒤집어 약 1~2분간 혼합하십시오.

Q8. 실험을 중단하고 싶습니다.

용해액을 첨가하여 원심분리기로 분리된 침전물을 -20°C에서 보관하십시오.

Q9. 냉장 원심분리기가 없습니다.

탁상용 원심분리기로도 추출이 가능합니다. 이 경우, 신속하게 작업을 진행하십시오.

Q10. 혈액 1mL에서 얼마나 많은 DNA를 추출할 수 있습니까?

시료에 따라 차이는 있지만, 정상인의 경우 약 20~70 μg의 DNA를 추출할 수 있습니다.

Q11. 이 키트로 조직에서 DNA를 추출할 수 있습니까?

네. 조직을 균질화하여 분해함으로써 DNA를 추출할 수 있습니다.

Q12. 배양 세포에서 DNA를 추출할 때 필요한 초기 세포 수는 얼마입니까?

10³에서 10⁶개의 세포면 추출에 충분합니다. 배양 세포에는 RNA가 혼입되어 있으므로, 프로테아제 처리 전에 20 μg/mL의 RNase A를 첨가하고 37°C에서 10분간 처리하십시오.

Q13. 미토콘드리아 DNA를 추출할 수 있습니까?

네. 다음 논문을 참조하십시오. Kubota, N., Hayashi, J., Inada, T. and Iwamura, Y.: Radiation Research, 148, 395 (1997).
미토콘드리아 DNA만을 추출할 경우, mtDNA Extractor^® WB Kit (Wako Cat. No. 293-54401) 및 mtDNA Extractor^® CT Kit (Wako Cat. No. 291-55301)의 사용을 권장합니다.

Q14. DNA Extractor^® Kit (Wako Cat. No. 295-50201)과는 어떤 차이가 있습니까?

사용 목적이 다릅니다. DNA Extractor® 키트는 혈청 내 소량의 바이러스 DNA(B형 간염 바이러스와 같은 DNA 바이러스) 및 생물학적 제제 내 소량의 곰팡이 유래 DNA를 추출하기 위한 반면, DNA Extractor^® WB 키트는 전혈 및 배양 세포에서 게놈 DNA를 특이적으로 추출합니다.

Q15. 프로테아제는 조제 후 어떻게 보관해야 합니까?

-20°C에서 6개월간 안정적입니다.

Q16. DNA Extractor^® WB-Rapid Kit와 어떤 차이가 있습니까?

DNA Extractor^® WB-Rapid Kit는 약 20분 만에 DNA를 추출할 수 있도록 개선된 제품입니다. 소량의 시료를 대량으로 처리하는 데 적합합니다.

Q17. 37°C에서 1시간 동안 프로테아제로 처리한 후에도 일부 불용성 물질이 남아 있습니다. 어떻게 해야 합니까?

1시간 내에 분해가 이루어지지 않는 것은 첫 단계에서 용해액으로 충분히 세척하지 않았기 때문으로 간주됩니다. 초기 단계에서 세포핵이 침전된 경우, 헤모글로빈에서 유래한 적색 색소가 제거될 때까지 세척을 반복하십시오.

Q18. 배양 세포에서 DNA를 추출할 때, 요오드화 나트륨을 첨가하는 시점에 흰색의 불용성 물질이 나타났습니다. 이 물질을 제거한 후 다음 단계로 진행해야 할까요?

배양 세포의 종류에 따라 불용성 물질이 관찰될 수 있습니다. 이 경우, 불용성 물질을 제거하지 않고 세척액(A)을 이용한 세척 단계로 진행해도 무방합니다. 세척액(A)을 첨가하면 불용성 물질이 용해될 것입니다. 만약 얻어진 DNA의 순도가 낮다면, 용해액을 이용한 세포핵 침전 과정을 반복하는 것이 좋습니다.

Q19. DNA의 A260/A280 비율이 1.8 이하입니다. 어떻게 해야 합니까?

DNA에 요오드화나트륨이 남아 있을 수 있습니다. 이 경우 세척액 (B)로 세척을 반복하십시오.

Q20. 참고 문헌이 있습니까?

다음 참고 문헌을 참조하십시오: Wang, L., Hirayasu, K., Ishizawa, M. and Kobayashi, Y.: Nucl. Acids Res., 22, 1774 (1994).

혈청 및 혈장에서의 게놈 DNA 추출

• 방법

  
  

  
  　　Operation time: 1 hour or more
  　　Sample amount: 100 μL/test

  ＊1 괄호 안에는 시료 200 μL로 시작하는 실험 절차가 나와 있습니다.
  ＊2 혈청(혈장) 시료는 얼음 위에서 취급하십시오. 혈청(혈장) 내의 DNase가 활성화되지 않도록 가능한 한 빨리 효소 반응 용액을 첨가하십시오.
  ＊3 사용 전에 키트에서 꺼내 얼음 위에서 옮겨 놓으십시오.
  ＊4 상층액을 버리고, 튜브를 거꾸로 뒤집어 종이 타월 위에 올려놓은 후, 튜브 입구를 종이 타월에 대고 눌러 남은 상층액을 제거하십시오.
  ＊5 세척액(A)을 첨가한 후, 시료를 -20°C에서 장기간 보관할 수 있습니다.
  ＊6 침전물이 튜브 벽에서 떨어질 때까지 잘 혼합하십시오.
  ＊7 침전물이 없어질 때까지 완전히 용해시키십시오.

• 이 키트는 DNA Extractor^® 키트의 개선된 버전으로, 혈청 또는 혈장 내 DNA 단편 추출에 최적화된 DNA 추출 키트입니다. 매우 높은 DNA 수율을 얻을 수 있어, 표적 유전자를 높은 민감도로 검출 및 분석하기 위한 전처리 시약으로 유용합니다. 또한, 이 제품은 페놀이나 클로로포름과 같은 유기 용매를 사용하지 않는 요오드화나트륨법을 채택하고 있습니다.

  특징

  • 소량의(100 μL) 혈청 및 혈장 시료에서도 높은 수율로 DNA를 얻을 수 있습니다.
  • 수율 100%에 가까운 “요오드화나트륨법”을 채택했습니다.
  • 페놀 및 클로로포름과 같은 유기 용매가 필요하지 않습니다.
  • 실리카 캐리어를 이용한 고체상 추출법을 사용하지 않아 높은 수율의 DNA를 얻을 수 있습니다.
  • PCR에 적합한 고품질 DNA를 얻을 수 있습니다.
  • 키트에 포함된 특수 제조 알코올 용액으로 혈액 시료에서 유래한 지질 등을 완전히 제거할 수 있습니다.
  • 모든 작업이 단일 튜브 내에서 완료됩니다.

  Kit Contents [50 tests (sample 100 μL)]

  1. Enzyme reaction solution..................................................10 mL × 1
  2. Protein digestion solution.............................................. 250 μL × 1
  3. Sodium iodide solution.....................................................15 mL × 1
  4. Alcohol solution..................................................................30 mL × 1
  5. Washing solution (A) ........................................................50 mL × 1
  6. Washing solution (B) ........................................................50 mL × 1

  DNA 추출 원리

  i. 혈청/혈장에서 유래한 단백질은 프로테아제에 의해 분해됩니다.
  ii. 혈청/혈장에서 유래한 단백질과 지질은 요오드화나트륨의 작용으로 용해되며, DNA를 침전시키기 위해 키트에 포함된 알코올 용액으로 제거됩니다.

  참고 문헌

  1) Ishizawa, M. et al., Nucleic Acids Res., 22, 1774 (1994).
  2) Sozzi, G. et al., Clin. Cancer Res., 5, 2689 (1999).
  3) Silva, J. M. et al., Cancer Res., 59, 3251 (1999).
  4) Shao, Z. M. et al., Clin. Cancer Res., 7, 2222 (2001).

DNA Extractor^® SP Kit Data

DNA Extractor^® SP Kit

사용 예시

인간 혈청 및 혈장에서 추출한 DNA의 p53-엑손 5 영역 증폭

이 키트를 사용하여 인간 혈청(10개 샘플) 및 인간 혈장(1개 샘플)에서 DNA를 추출하고, 20 μL의 TE 완충액(pH 8.0)에 용해시켜 DNA 샘플을 준비했습니다. 각 시료 5 μL를 사용하여 p53-Exon 5 영역(308 bp)을 증폭했습니다. 대조군으로 실리카 캐리어를 이용한 추출 원리(원심 분리 여과법)에 기반한 DNA 추출 키트(A사)와 비교했습니다.

DNA Extractor^® SP Kit

를 사용하여 1~5 mL 시료에서 DNA를 추출하는 방법

TE 완충액에 용해시킨 후, 불용성 물질이 침전되었고 배경에서 흡광도가 검출되었습니다(320 nm 흡광도). 이는 표준 방법(100~200 μL 추출)보다 순도가 낮음을 나타냅니다. 그러나 PCR을 통한 증폭은 성공적으로 수행할 수 있습니다.

8-OHdG 측정을 위한 DNA 추출
인간 및 동물 실질 조직에서의 DNA 추출

• Methods

  

• DNA Extractor^® 키트 시리즈의 기본 원리인 요오드화나트륨법은 작업 중 DNA 산화가 비교적 적게 발생하는 DNA 추출법으로 알려져 있습니다. 이 키트는 산화 억제제를 사용하여 DNA 산화를 더욱 억제하며, 산화 스트레스 지표인 8-OHdG(8-하이드록시-2'-데옥시구아노신)의 측정에 유용합니다.

  특징

  • 산화 스트레스 마커의 검출 및 측정에 유용합니다.
    요오드화나트륨법은 작업 중 DNA의 산화를 거의 유발하지 않습니다. 산화 억제제를 사용함으로써 DNA의 산화를 더욱 억제합니다.
  • 페놀이나 클로로포름과 같은 유기 용매가 필요하지 않습니다.
  • 인간 및 동물의 실질 조직에서 DNA를 추출하는 데 적합합니다.

  Kit Contents [50 tests (sample 100μL)]

  1. Lysis solution..................................75 mL × 2
  2. Enzyme reaction solution.................15 mL × 1
  3. RNase solution .................................50 μL × 1
  4. Protein digestion solution.................750 μL× 1
  5. Oxidation inhibitor ...........................350 μL × 1
  6. Sodium iodide solution......................15 mL × 1
  7. Alcohol solution.................................30 mL × 1
  8. PEG solution ....................................20 mL × 1

프로토콜 1은 프로테아제 처리 전에 RNase 처리를 수행하는 간소화된 방법입니다.
프로토콜 2는 DNA의 순도를 높이기 위해 프로테아제 처리와 RNase 처리를 별도의 공정으로 수행하는 폴리에틸렌글리콜(PEG) 침전법을 이용한 DNA 추출 방법입니다.
두 방법 간에 8-OHdG의 양에는 차이가 없으며, DNA 산화 억제 수준도 비슷합니다.

＊1 이 프로토콜을 사용하면 DNA 순도를 높일 수 있습니다.
＊2 효소 반응 용액에 침전물이 있는 경우, 37°C로 가열하거나 실온으로 되돌려 침전물을 완전히 용해시킨 후 혼합하여 사용하십시오.

DNA Extractor^® TIS Kit 데이터

마우스 간에서 DNA 추출 및 8-OHdG 측정

DNA Extractor^® WB Kit [Wako Cat. No. 291-50502]와 DNA Extractor^® TIS Kit [프로토콜 1]을 사용하여 마우스 간(동일한 마우스)에서 DNA를 추출했습니다. 추출된 DNA는 뉴클레아제 P1로 처리한 후, High Sensitive 8-OHdG Check [Wako Cat. No. 307-07921] 및 HPLC/ECD를 사용하여 8-OHdG의 양을 측정하였으며, 두 방법을 비교했습니다.

법의학적 시료로부터의 DNA 추출
(체모, 혈흔, 타액 흔적, 손톱 등 미량 시료로부터의 DNA 추출)

이 키트는 신원 확인에 사용되는 체모(모발), 혈흔, 타액 흔적, 손톱과 같은 법의학적 시료에서 미량의 DNA를 추출하기 위한 것입니다. 일부 사례에서는 DNA 수율이 낮아 판정에 장애가 될 수 있으나, 본 키트는 시료를 신속하게 용해시켜 STR(단일 염기 반복 서열) 및 미토콘드리아 DNA의 고변이 영역 증폭에 적합한 DNA를 효율적으로 추출합니다. 또한, 본 제품은 페놀이나 클로로포름과 같은 유기 용매를 사용하지 않고 요오드화나트륨 방식을 채택하고 있습니다.

• 인간의 모발에서 DNA를 추출하는 방법

  

  참고

  Wang, L. et al., Nucleic Acids Res., 22, 1774 (1994).

• 특징

  • 체모(털), 혈흔, 손톱과 같이 용해도가 낮거나 극미량의 시료에서도 DNA를 추출할 수 있습니다.
  • 모간에서도 DNA를 추출할 수 있습니다.
  • 고체상 추출 과정을 거치지 않아, 운반체에 의한 흡착으로 인한 극미량 DNA의 손실을 줄일 수 있습니다.
  • 페놀이나 클로로포름과 같은 유기 용매가 필요하지 않습니다.
  • PCR에 적합한 DNA를 얻을 수 있습니다.

  Kit Contents [50 tests]

  1. Lysis solution..................................................................9.5 mL × 1
  2. Enzyme activated reagent (EAR)..................................80 mg × 1
  3. Reconstitution solution for EAR.....................................500 μL× 1
  4. Protease...........................................................................10 mg × 1
  5. Sodium iodide solution.................................................. 12.5 mL× 1
  6. Washing solution (A) ........................................................50 mL × 1
  7. Washing solution (B) ........................................................50 mL × 1

  시료 양

  • 체모: 1cm 이하. 멜라닌에 의한 PCR 반응 억제 가능성이 있으므로, 가능하면 2가닥 이하(총 길이 2cm 이하)를 사용해야 합니다.
  • 혈흔 및 타액 얼룩과 같은 흔적:
    약 5mm × 5mm 크기로 잘라내십시오.
    검사당 5 mm × 5 mm 크기의 얼룩을 최대 2개까지 사용하십시오.
  • 손톱: 0.5 mg 이하(약 1 mm × 1 mm 크기)의 손톱을 약 0.5 mm × 1 mm 크기로 잘라내십시오. 조각이 작을수록 DNA 추출이 더 쉬워집니다.
  

DNA 추출기^® FM 키트 데이터

모근에서 추출한 DNA를 이용한 미토콘드리아 DNA의 고변이 영역(16159-16401번 염기 위치)에서의 핵산 증폭 반응.

• 
• 남성과 여성의 모발 길이는 레인 왼쪽부터 각각 0.5cm, 1.0cm, 1.5cm입니다.
  여성 3번을 제외한 모든 피험자에서 동일한 밴드(240bp)가 검출되었습니다. 여성 3번은 염색 및 펌을 한 모발입니다.

다양한 종류의 염색제로 염색한 모발에서 추출한 DNA를 이용한 미토콘드리아 DNA의 고변이 영역 증폭.

• 
• 모발의 길이는 모두 레인 왼쪽으로부터 0.5cm와 1.0cm 지점에 위치합니다. 염색약을 사용해 염색한 모발을 제외하고는, 염색 방식이 다른 모발들에서 동일한 밴드(240bp)가 검출되었습니다.
  염색약을 사용해 염색한 모발의 경우, 모발 내 DNA 자체가 분해 등의 영향을 받았거나, 염료 자체가 PCR을 억제하는 효과를 일으켰을 가능성이 있습니다.

포유류 조직 및 세포에서 미토콘드리아 DNA를 빠르고 간편하게 추출하기
사료에서 미토콘드리아 DNA 추출

• Procedure

  

• 주요 기능

  • 아가로즈 겔 전기영동으로 검출된 미토콘드리아 DNA(mtDNA)는 50~250 mg의 조직에서 추출할 수 있습니다.
  • 추출된 mtDNA는 PCR 및 제한 효소 분해에 사용할 수 있습니다.
  • 동결 조직에서도 mtDNA를 추출할 수 있습니다.
  • 페놀이나 클로로포름과 같은 유기 용매는 필요하지 않습니다.

  원리

  1. 세포 용해물을 원심분리하여 미토콘드리아 분획을 얻습니다.
  2. 플라스미드 DNA 정제에 사용되는 알칼리-SDS법을 통해 알칼리 변성 및 침전을 일으켜 미토콘드리아 분획 내의 게놈 DNA를 제거하고, 원형 DNA인 미토콘드리아 DNA를 회수합니다.
  3. 오염 단백질은 요오드화나트륨으로 용해시키고, 미토콘드리아 DNA는 세척 용액으로 정제합니다.

mtDNA Extractor™ CT 키트 데이터

Extraction of mitochondrial DNA from fresh and frozen mouse tissues

주의 사항

이 키트는 소량의 미토콘드리아 DNA를 추출하도록 설계되었으므로, 미토콘드리아 DNA를 검출할 때는 GelRed™ 염색을 권장합니다. 에티디움 브로마이드 염색으로는 미토콘드리아 DNA를 검출할 수 없습니다.

조직 내 8-OHdG를 측정할 때는 조직에서 추출한 DNA를 가수분해해야 합니다. 본 제품은 8-OHdG 측정 전처리에 사용되는 효소, 완충액 등이 포함된 시약 키트입니다.
측정 대상 DNA 시료에 각 시약을 지정된 양만큼 첨가하여 반응을 촉진함으로써, 뉴클레아제 처리 상태(단일 뉴클레오티드 방출)에 따른 변동성을 줄이고 8-OHdG의 안정적인 측정을 실현합니다.

방법

Kit Contents [50 tests]

1. Acetic acid buffer..................................................... 950 μL × 1
2. Nuclease P1..............................................................500 units × 1
3. Tris buffer ....................................................................... 1 mL × 1
4. Alkaline phosphatase solution..........................................50 μL× 1