抗マウスIgG, ヤギ, SPICA DyeTM 647結合 Anti Mouse IgG, Goat, SPICA DyeTM 647 Conjugated

抗マウスIgG, ヤギ, SPICA Dye™ 647結合はヤギ由来の抗マウスIgG抗体に富士フイルムで開発した新規高耐光性蛍光色素であるSPICA Dye™ 647を標識した二次抗体です。従来の蛍光色素と比較して、光褪色しにくいことが特長です。免疫組織染色や免疫細胞染色に使用することができます。

抗体情報

抗体種	ポリクローナル抗体
抗原	マウス IgG
免疫動物	ヤギ
組成	PBS、0.05% アジ化ナトリウム
標識	SPICA Dye™ 647
交差性	マウス
アプリケーション	免疫組織染色 (凍結切片)　1:500-1,000 免疫細胞染色　1:500-1,000

励起波長・蛍光波長

SPICA Dye™ 647

(Excitation=651 nm, Emission=670 nm)

プロトコル (例)

抗GFAP抗体および抗マウスIgG, ヤギ, SPICA Dye™ 647結合によるマウス脳凍結切片の免疫染色

1.灌流固定

0.1% くえん酸ナトリウムPBSによる脱血後、4% PFA灌流

2.後固定

4% PFA (24時間)

3.スクロース置換

30% スクロースPBS (4 ℃、一晩-2日程度)

4.凍結切片作製

スクロース除去後、凍結包埋ブロックを作製し、クライオスタットによる30 μm厚スライス作製

5.ブロッキング

5% BSA、2% 正常ロバ血清、0.3% TritonX-100/PBS (室温、2時間)

6.一次抗体

抗GFAP, モノクローナル抗体 (MO389) (コードNo. 018-27283) 1:1,000 (4 °C、一晩)

7.洗浄

0.3% TritonX-100/PBS (5分 x 3回)

8.二次抗体

抗マウスIgG, ヤギ, SPICA Dye™ 647結合 (本製品) 1:500、 0.3% TritonX-100/PBS (室温、2時間)

9.洗浄

0.3% TritonX-100/PBS (5分 x 3回)

10.封入

マウント剤 (例: Invitrogen™ ProLong Glass)にて封入し、4 ℃、暗所保存

性能データ

キセノン耐光試験機を用いた従来色素との耐光性評価

500Wキセノンランプとガラスフィルターを設置したXe耐光試験機を用いて、 SPICA Dye™ 647もしくはAlexa Fluor^® 647を標識した抗ウサギIgG, ヤギ抗体 (Jackson ImmunoResearch社、コードNo. 566-71221) のPBS溶液に連続的にキセノン光を照射した。吸収極大ピークの吸光度変化をプロットし、両色素の耐光性比較を行った。

[結果]
SPICA Dye™ 647標識抗体は他社蛍光色素より高い耐光性を示した。

免疫組織染色での耐光性比較

免疫組織染色を行ったマウス凍結切片サンプルに対して、共焦点顕微鏡でのZ-stack撮影を計10回実施し、蛍光強度を測定した。

動物種	マウス (C57BL6/J)
部位	海馬
サンプル	凍結切片
一次抗体	抗GFAP, モノクローナル抗体(MO389) (コードNo. 018-27283）1:500
二次抗体	抗マウスIgG, ヤギ, SPICA Dye™ 647結合 (本製品）1:500 抗マウスIgG(H+L),ヤギ, Alexa Fluor® 647標識 (コードNo. 564-78841) 1:500

撮影条件

顕微鏡	CLSM (Nikon) （型番：ECLIPSE Ti）
対物レンズ	Plan Apo VC　倍率×20倍
開口数（NA）	0.75
励起波長	647 nm
検出波長	660-1,000 nm
撮影ステップ	3.0 μm x 8 Steps
Scan Speed	0.125 Frame/sec (pixel Dwell/5.3 μsec)

[結果]
Alexa Fluor^® 647標識抗体と比較し、SPICA Dye™ 647標識抗体は光褪色が緩やかに進むことが確認された。

※ Alexa Fluor^®はインビトロジェン株式会社の登録商標です。