エタ沈メイト (アルコール沈殿用共沈剤) Ethachinmate

特長

微量核酸の回収が可能

20ng/ml以上のDNA(>100塩基対)及びRNA(>120塩基)を定量的に回収できます。

迅速なアルコール沈殿が可能

-20°Cあるいは-80°Cのインキュベーションが不要なので、アルコール添加後直ちに遠心できます。

酵素反応を阻害しない

回収した核酸は、水やバッファーに容易に溶けます。しかも混在するEthachinmateは酵素反応を全く阻害しません。

沈殿を目で確認できる

Ethachinmate自身がアルコール沈殿によって沈殿を形成するので、微量な核酸の場合でも大切な試料を洗い流してしまう心配はありません。

DNase, RNase free試験済み

EthachinmateはDNase, RNase freeであることを確認しています。

DNAのエタノール沈殿（エタチンメイトを使用の場合）

DNA溶液 （100 μl）
↓←3.3 μl 3M Sodium Acetate（もしくは3M Sodium Acetateを核酸水溶液の1/10倍量添加） ^*1
↓←1-2 μl Ethachinmate ^*2
↓ボルテックスで混合する ^*3
↓←2-2.5倍量 Ethanol（水溶液100 μlの場合、エタノールは250 μl）
↓ボルテックスで混合する ^*3
↓遠心(12,000×g, 5分間) ^*4
↓上清を取り除く ^*5
沈澱 ^*6
↓^*7
↓←1 ml 70%Ethanol
↓チューブ壁面を洗うように軽く混ぜる
↓遠心(12,000×g, 2分間)
↓上清を取り除く
沈澱

*1 塩濃度は終濃度0.1M以上とする。DNA溶液がすでに高塩濃度の場合は加えなくてもよい。
*2 Ethachinmate はDNA溶液100 μlあたり1 μl加える。ただし、溶液量が300 μl以上の場合は3 μlあれば十分である。Ethachinmateは一度添加したらその後追加する必要はない。Ethachinmate を繰り返し加えるとDNA溶液が粘稠（ねんちゅう）になり、以後の操作に支障をきたす場合もある。
*3 ボルテックスを行うことにより、微量DNAでも定量的に回収できる。
*4 必ずしも冷却の必要はない。
*5 沈澱は目で確認できる。沈澱を見失わないようにする。
*6 ここで得られた沈殿は、別の緩衝液に溶解し、そのまま各種酵素の基質として使用できる。
*7 必要に応じて70％エタノールでチューブ内部を洗浄する。

ISOGEN法RNA抽出プロトコール（エタチンメイトを使用の場合）

ISOGEN（Code No. 311-02501）などの一液タイプのRNA抽出試薬を用いてtotal RNAを抽出する際、RNA沈澱が見えにくい場合はエタチンメイト（高分子キャリアー）を添加すると、目視しやすくなります。

サンプル（微量）
↓←ISOGEN
↓ホモジナイゼーション、室温 5分間
↓←クロロホルム
↓激しくシェイクして混合、室温 3分間
↓遠心 15分間　（液相分離）
水層を新しいチューブに移す
↓←1-2 μl, Ethachinmate ^*1
↓ボルテックス ^*2
↓←イソプロパノール
↓転倒混和、室温 10分間
↓遠心 10分間
↓上清を取り除く
沈澱
↓←70%エタノール
↓ボルテックス
↓遠心 5分間
↓上清を取り除く
沈澱
↓風乾
↓←RNaseフリー水またはTE(pH8.0)
total RNA溶液

*1　ISOGEN法で液相分離した後の水層はすでに高塩濃度のため、Ethachinmateに添付されているSodium Acetateは添加しないでください。
*2　Ethachinmate の添加と混合は、アルコールを加える前に行います。

微量核酸の回収

λ/HindIII(10 ng/500 µl)を0.1 mol/l 酢酸ナトリウム存在下にて1 ml のエタノールを加え、沈殿させた回収DNAをアガロースゲル電気泳動した。

Lane 1 : λ/HindIII (control)
Lane 2 : λ/HindIII＋Ethachinmate 3 µl (ただちに遠心)
Lane 3 : λ/HindIII -20°C, over night
Lane 4 : λ/HindIII -80°C, 20分間

結果

0.1 mol/l 酢酸ナトリウム存在下でEthachinmateを添加すると、低温保存をしなくても微量DNAが定量的に回収できることがわかった。

低分子RNAのエタノール沈殿

21塩基の合成RNAをエタノール沈殿し、Ethachinmateを添加した場合（+）と添加しなかった場合（－）での回収量を比較した。