スフェロイド受託作製サービス

スフェロイドとは肝細胞や神経組織など幅広い種類の細胞の集合体のことであり、互いに接着することで3D立体構造を形成します。
昨今、２D培養から３D培養にシフトすることで、細胞の生理学性が高まることが知られています。
３D培養の中でもスフェロイドは、さまざまな微小環境の再構築に適しています。

基本的には、お客様からお送りいただいた細胞を用いて、ご要望に沿ったスフェロイドを作製致します。
また、一般的なスフェロイドを用いたアッセイ法なども実施可能ですのでお問合せください。

特徴

• 細胞だけでなく、高分子なども混ぜ込むことが可能*なため、より生理学性の高いスフェロイドを作製可能
• 従来法ではスフェロイドの作製が困難な接着力の弱い細胞でも、スフェロイドの作製が可能
• スフェロイドに関し、作製や評価のコンサルティングも可能

*特許取得済　6176770　

1. コンサルティング　Lite

   細胞培養の基礎的な質問や、おおまかな実施内容、評価内容の案はあるが、具体化するのが難しい、評価法が適切か不安等、専門家の意見を聞いてみたい、あるいは相談してみたいなど、ありましたら、お気軽にお声がけください。

   ◆コンサルティング費用：初回に限り　３万円/回（最大１時間　Web限定）

2. コンサルティング

   ヒアリングシートにご相談内容を記載いただき、1度web面談を実施。
   詳しいご相談内容をお伺いし、御見積り等を提出、その後、コンサルティングを実施致します。

   ​◆コンサルティング費用：１０万円/回（１回あたり最大２時間　Web）

3. スフェロイド試作・生産

   ユーザー様ご要望のスフェロイドを試作・量産致します。まずは仕様書にどのようなスフェロイドを作製したいかお伺いさせていただきます。 ＊どのような仕様が適切かご相談をご要望の場合はコンサルティング費用が発生致します。

4. その他
   • スフェロイド評価、細胞培養に関する評価
   • トレーニングプログラム

   ご興味がございましたら、お問合せください。

前記、【ハイドロゲルビーズによる間隙構造を持つスフェロイド】を用いたアッセイ例

【目的】

間隙構造を持つ肝スフェロイドの薬剤応答性を評価する

【仮説】

間隙構造により、スフェロイドの中心部まで薬剤が行き渡り、死細胞率が上がるのでは？

アッセイ方法

作製したスフェロイドに薬剤を投与し(1日)、LIVE/DEAD染色およびLDH測定を実施

アッセイ結果

1.LIVE/DEAD染色

【薬剤暴露条件】
　・フルタミド　600μM
　・マイトマイシン C 　100μM

【スフェロイド構成　細胞数とビーズ数】　
　細胞：ヒト肝細胞癌細胞株　Huhｰ7
　・ビーズ無しスフェロイド：細胞数2000
　・ビーズ有りスフェロイド：細胞数2000/ビーズ数2000

2.LDH測定

【薬剤暴露条件】
　・マイトマイシン C 　0μM、10μM、100μM

【スフェロイド構成　細胞とビーズ数】　
　細胞：ヒト肝細胞癌細胞株　Huhｰ7
　・ビーズ無しスフェロイド　細胞数2000/ビーズ数2000

【結果】
ハイドロゲルビーズを埋め込みスフェロイド内部に分岐・連通した
流路状の間隙を作り込むことで、薬剤に対する応答性の変化が見られた。
これにより、ハイドロゲルビーズがスフェロイド内部における物質交換向上に寄与していると示唆される。

参考文献

Y.Watanabe, Evaluation of drug response using spheroids with microchannels,
The 34^th Annual Meeting of the Japanese Society for Alternatives to Animal Experiments, 2021

増粘剤として食品添加物に使われているメチルセルロースを3％の濃度で培養液に溶かすと、水飴状の非常に高粘性な培地となる。
ここに細胞などを懸濁した通常の培地を吐出すると、メチルセルロースが通常の培地を吸収しながら膨潤する。
その結果、懸濁されていた細胞などが凝集する。

【Step1】細胞、ハイドロゲルビーズなどが分散・懸濁した培地1µlを3%メチルセルロース培地に吐出
【Step2】細胞、ハイドロゲルビーズなどが凝集状態となり、メチルセルロース培地中で1日浮遊培養
【Step3】セルラーゼ処理によってスフェロイドを回収