ブレビバチルス菌発現系によるタンパク発現
枯草菌近縁種であるブレビバチルス (Brevibacillus choshinensis) を用いたタンパク質発現サービスです。
タンパク質を菌体外に高分泌生産が可能な宿主で、エンドトキシンを持たない、菌体外プロテアーゼ活性が低い、安全性（GILSP掲載宿主）が高い、正しい立体構造を取りやすいなど、優れた特長があります。
（Takagi et al ., 1993, Int J Syst Bacteriol）
サービスの流れ
納品物
- 精製物（生産のみの場合：培養上清）
- ベクター
- 試験報告書
生産例１：Fab抗体の分泌生産
Fab抗体は、重鎖 (Hchain) と軽鎖 (Lchain) がジスルフィド (SS) 結合で結びついた分子です。
両遺伝子を導入した発現ベクターを構築することで、ブレビバチルス菌においてFab抗体をSS結合、抗原結合能を保持した状態で分泌生産させることができます。
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培養上清からプロテインLカラム精製したFab抗体
生産例２：PD-1/PD-L1/PD-L2の生産
PD-1/PD-L1/PD-L2は免疫チェックポイント関連分子として知られ、阻害剤の探索研究が進められています。PD-1の細胞外ドメイン及び、そのリガンドであるPD-L1, PD-L2 (ヒト、イヌ、ネコ) をブレビバチルス菌で発現、培地中 (培養上清) への分泌生産量を確認しました。
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イヌPD-1/PD-L1/PD-L2の培養上清からの簡易精製の結果 -
ヒト イヌ ネコ PD-1
(extracellular)3 40 80 PD-L1 25 2 5 PD-L2 25 5 2 1L培養当たりの分泌生産量 (概算、mg)
生産例３：PET分解酵素の生産
PETase, MHETaseは芳香族ポリエステル(PET)を分解する酵素として見出され、その工業利用に期待を持たれています。これらをブレビバチルス菌で生産したところ、高い分泌生産性(PETase; ～100 mg/L, MHETase; ～40 mg/L)と、分解酵素活性を確認しました。
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PET分解の機構
PET; poly(ethylene terephthalate)
(or BHET; bis(2-hydroxyethyl) terephthalate)
↓ PETase
MHET; mono(2-hydroxyethyl) terephthalate
↓ MHETase
ethylene glycol + terephthalate -
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