脱灰剤

骨、軟骨、歯などの硬組織や石灰化病変、結石を含む組織はそのままでは硬いため薄切することが困難です。脱灰とは、硬組織や石灰化した組織からカルシウムを除去し、薄切を容易にする工程です。当社では各種組織脱灰液をラインアップしております。また塩酸、EDTAを主成分とし、酸脱灰のように脱灰速度が速く、キレート脱灰のように免疫染色にも使用可能なカルキトックス™はお薦めの脱灰剤です。

製品ラインアップ

組織脱灰液シリーズ

学術コンテンツ

酸による脱灰

酸を使用する方法では、試料を酸の希釈液に浸けて脱灰します。良く使用される酸として硝酸やトリクロロ酢酸、ぎ酸が挙げられますが、塩化アルミニウム、塩酸、ぎ酸からなるプランク・リュクロ(Plank-Rychlo)液やぎ酸、クエン酸ナトリウムからなるモールス(Morse)液などの混合液も使用されます。それぞれの特長を下記にまとめました。

酸	特長	注意点
硝酸 (5～7.5%)	・脱灰速度が速い	・組織の膨化が生じるため、5%硫酸ナトリウムによる中和が必要・長時間脱灰すると染色性が大きく損なわれる
トリクロロ酢酸 (5%)	・脱灰速度が速い・核の染色性が低下しづらい	・組織の膨化が生じるため、脱灰後、高濃度エタノールに直接移す
ぎ酸 (1~5%)	・脱灰速度が速い・染色性の低下がほとんどおこらない・組織の収縮がほとんどおこらない	－
プランク・リュクロ液	・脱灰速度がきわめて速い　 (硝酸, ぎ酸の3倍速い)	・中和や水洗が十分でないと染色性が大きく低下する・組織の膨化が生じるため、5%硫酸ナトリウムによる中和が必要
モールス液	・組織の膨化が生じにくい・免疫染色、in situ hybridizationにも使用可能 (EDTA脱灰と同程度)	・脱灰速度が遅い (5%硝酸の3倍遅い) 　※EDTA脱灰よりは8倍速い・5%硫酸ナトリウムによる中和が必要

キレート剤による脱灰

EDTAをはじめとするキレート剤による脱灰は、免疫原性や酵素活性を維持することができるため、免疫染色やin situ hybridization(ISH)の際に使用される脱灰法です。また組織構造への影響も少ないので、微細構造の観察にも適しています。一方で脱灰速度が遅いことが欠点であり、脱灰に数週間要します。

参考文献

高田邦昭, 斎藤尚亮, 川上速人編: 「第5版実験医学別冊染色・バイオイメージング実験ハンドブック」 (羊土社) (2012)
高橋英機監修, 大久保和央著: 「細胞・組織染色の達人」(羊土社) (2018)