JNC エンドトキシン除去用充填剤 セルファイン™ ETクリーン
セルファイン™ ETクリーンは、真球状のセルロース粒子に安全性の高い天然のポリカチオンであるポリ-ε-リジンを固定化したクロマトグラフィー充填剤です。サンプルに混在するエンドトキシンを高選択的に除去することができます。高塩濃度の条件でもエンドトキシンは脱離しない為、タンパク質からエンドトキシンを除去したい場合、好適に使用できます。 ポリ-ε-リジンはアフィニティリガンドですが、タンパク質とは異なり、過酷な条件でも失活しません。
特長
- アルカリ処理においても高い耐久性
- エンドトキシンの選択的吸着が可能
- 高流速での操作が可能
- 安全性が高い（ポリ-ε-リジンは食品の日持ち向上剤としても広く利用）
| セルファイン™ ETクリーンS |
セルファイン™ ETクリーンL |
|
|---|---|---|
| マトリックス | 真球状、セルロース粒子 | |
| 平均粒子径 | 90 μm | |
| リガンド | ポリ-ε-リジン | |
| 排除限界分子量 | 2000 | ＞2×106 |
| pH安定性 | 2 ～ 13 | 1 ～ 13 |
| 操作圧 | ＜0.30 MPa | ＜0.20 MPa |
| 保存液 | 20％ エタノール水溶液 | |
ETクリーンSは細孔サイズが小さく、ETクリーンLはタンパク質が入る大きな細孔サイズを持っています。
ET クリーンS (細孔の排除限界分子量 2,000 Da、多くのタンパク質は細孔内に入らない)
ET クリーンL (細孔の排除限界分子量 2 x 106 Da、多くのタンパク質は細孔内に入る)
様々なタンパク質からのエンドトキシンの除去性能
| サンプル | ETクリーン S | ETクリーン L | |||
|---|---|---|---|---|---|
| タンパク質 (pI) |
除去前のエンドトキシン量 （pg/mL) |
(0.02M PB, pH7.0, μ=0.0) | (0.02M PB+0.36M NaCl, pH7.0, μ=0.40) |
||
| 除去後のエンドトキシン量 (pg/mL) |
タンパク質回収率(%) | 除去後のエンドトキシン量 (pg/mL) |
タンパク質 回収率(%) | ||
| Ovalbumin(4.6) | 28,000 | 81 | 99 | <10 | 95 |
| BSA(4.9) | 32,000 | 45 | 99 | <10 | 97 |
| Myoglobin(6.8) | 4,500 | 18 | 99 | <10 | 98 |
| γ-globulin(7.4) | 5,600 | 20 | 99 | <10 | 97 |
| Cytochrome C(10.6) | 1,500 | 15 | 99 | <10 | 98 |
0.3mLのETクリーンに2mLのタンパク質溶液（1 mg/mL, LPS:各種タンパク試薬に混入していたもの）を加えた。
1 endotoxin unit (EU) ＝250pg LPS で換算可能。
ETクリーンSは除去率に優れ、ETクリーンLは除去量に優れる。
BSAからのエンドトキシン(LPS)の選択性
エンドトキシン吸着試験はバッチ法による吸着で評価した。
ゲル0.2gを2mL のサンプル溶液
（BSA: 500 μg/ml, E. coli O111: B4 LPS: 100 ng/ml,
pH 7.0, NaCl濃度:mol/L = 0.05-0.8）に加えて上清を回収して評価した。
Q&A
セルファイン™ETクリーンにはETクリーンSとETクリーンLの２つのラインアップがありますが、それぞれの違いを教えてください。
リガンドは同一です。違いはベース担体の細孔の大きさです。
①セルファインETクリーンS
細孔サイズが小さく、タンパク質は内部に入りません。
このため非特異的吸着が少なく、優れた回収率を示します。
②セルファインETクリーンL
細孔サイズが大きく、タンパク質が内部に入ります。このためETクリーンSよりイオン交換的なタンパク質吸着活性を示します。表面積が大きいためより多くのエンドトキシンを吸着させることができます。
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