ニッポンジーン LAMP法用核酸増幅試薬
＆蛍光検出装置 GENEMALシリーズ

LAMP法用蛍光検出装置GENEMAL（ジェネマル）は、インターカレーター法による等温遺伝子増幅検出用の装置です。

操作用のタッチパネルを搭載しており、本品単体で等温反応、蛍光測定、結果確認等が可能です。また、測定した蛍光値をUSBメモリにテキストファイル形式で出力できるため、PCにデータを移すことができます。

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「GENEMAL LAMP FL Mix」は、LAMP法による等温核酸増幅のためのマスターミックスです。LAMP法に必要な耐熱性鎖置換型DNAポリメラーゼ、Mg²⁺、dNTPs、至適化されたバッファーなどを含むため、LAMP FL Mix (2×) にプライマーと鋳型核酸を添加するだけでLAMP法によるDNA増幅を行うことができます。本品はインターカレーター（二本鎖DNA結合性蛍光色素）と耐熱性ピロホスファターゼを含むため、増幅したDNAを蛍光検出装置 ^＊ によって検出することができます。

^＊LAMP法用蛍光検出装置「GENEMAL」（Code No.319-09481）、またはリアルタイムPCR装置が使用できます。なお、濁度測定装置では検出できません。

特長

• 高い特異性
• わずか数十分で遺伝子検出可能
• プライマーと鋳型核酸を入れるだけ
• 超軽量・コンパクトな蛍光検出装置GENEMALに最適化

使用例 リアルタイムPCR装置を用いた増幅産物の蛍光検出（他社品との比較）

各社LAMPマスターミックスの反応性を比較するため、陽性コントロールDNA、その10倍希釈液と no-template control (NTC) を鋳型に3 well並行でLAMP反応を実施し、ターゲットの増幅と融解曲線解析を実施しました。

結果 GENEMAL LAMP FL Mixでは、陰性コントロールで非特異増幅がなく、高い特異性で増幅が認められました。

野生鳥獣の食肉処理施設あるいは二次加工を行う施設において、食中毒菌の検出は非常に重要です。代表的な食中毒菌として、サルモネラ属菌、カンピロバクター、腸管出血性大腸菌などが挙げられます。

LAMPプライマーセットfor GENEMALは、LAMP法を用いて食中毒菌を検出するためのプライマーセットです。LAMP 法用核酸増幅試薬「GENEMAL LAMP FL Mix」（Code No.313-09521）と組み合わせて使用すると、増幅したDNAを蛍光検出装置 ^＊ によって検出することができます。

^＊LAMP法用蛍光検出装置「GENEMAL」（Code No.319-09481）、またはリアルタイムPCR装置が使用できます。なお、濁度測定装置では検出できません。

品目

特長

• わずか数十分で遺伝子検出可能

使用例

LAMP法用蛍光検出装置GENEMALを使用する場合の操作手順

1. 対象ごとに適した方法を用いて鋳型核酸を調製します。なお、本品は、精製された核酸をTemplateに用いることを推奨します。
   

   重要 試験環境の汚染を避けるため鋳型核酸の調製は本品を使用する区域とは区別して行ってください。

2. LAMP法用核酸増幅試薬「GENEMAL LAMP FL Mix」を用いて、25 μl反応系で反応液を調製します。

   LAMP FL Mix(2×)	12.5 μl
   10×LAMP Primer Mix	2.5 μl
   Template＊	～5.0 μl
   d.d.Water	up to 25.0 μl

   ^＊ Templateとして、 まず、陰性コントロール（2.5 μlのd.d.WaterやTE等）を添加して、 次に、鋳型核酸を添加し、最後に、陽性コントロール（2.5 μlのPositive Control DNA）を添加してキャップを閉じます。

3. LAMP法用蛍光検出装置GENEMALに測定条件（65℃、40分）を入力し、確定します。

   

4. 装置に反応チューブをセットし、測定を開始します。

5. 装置画面上に測定結果が表示されます。

   運転中および運転停止後のしばらくは上蓋をあけず、温度が下がってから反応チューブを取り出します。

   重要 増幅産物による汚染を防ぐため、反応後のチューブのキャップは開けず、ジップ袋等に密閉した上で廃棄してください。

   蒸気により増幅産物が拡散するおそれがあるため、廃棄の際はオートクレーブを行わないでください。

   特に反応チューブを装置から取り出すときにチューブのキャップが開かないよう注意してください。

   

   

実験例 コロニーからの食中毒菌の検出

食中毒菌コロニーから下記方法で調製した試料をテンプレートに、装置GENEMALと専用増幅試薬「GENEMAL LAMP FL Mix」を用いてLAMP法による増幅およびサルモネラ属菌と腸管出血性大腸菌（EHEC）の検出を行った。食中毒菌検出用プライマーには、ポジティブコントロールDNAが付属した「LAMP Primer Set」を使用した。

1. テンプレートの調製（前処理）

   白金耳でかき取った食中毒菌のコロニーを200 µl のTE（pH8.0）を添加した1.5 mlマイクロチューブ内で懸濁し、熱処理（95℃,10分間 ^＊1）後、12,000×gで1分間遠心して得られた上清をテンプレートとした。 ^＊11 装置GENEMALはこの熱処理の工程に対応していません。

2. 反応液の調製

   1反応あたり
   LAMP FL Mix(2×)	12.5 μl
   10×LAMP Primer Mix	2.5 μl
   Templateor or コントロールDNA or TE(pH8.0)	2.5 μl
   d.d.H2O	up to 25.0 μl

3. GENEMALによる測定（LAMP反応 65℃、40分間）

   結果 GENEMALシリーズの装置および試薬を用いることで、各コロニーがSalmonellaまたはEHECであることを確認できた。

   

   Salmonella	Template	S.Typhimurium(6コロニー)
   	NC	TE(pH8.0)
   	PC	Salmonella Positive Control DNA

   

   EHEC	Template	O157(3コロニー),092/093/094(各1コロニー)
   	NC	TE(pH8.0)
   	PC	EHEC Positive Control DNA

本実験データは、岩手大学 農学部 共同獣医学科 獣医公衆衛生学研究室 山﨑 朗子 先生よりご提供頂きました。