同仁化学　酸素消費速度プレートアッセイキット

本キットには、培地中の酸素濃度が高いほどりん光が弱くなる特性を持つOxygen Probe と、Well内に空気中の酸素流入を遮断するためのMineral Oil を同梱しています。
細胞外の酸素濃度に応じたりん光強度を蛍光マイクロプレートリーダーで測定後、Stern-Volmerの関係式より細胞のOCR を算出（自動計算シート）します。

	同仁化学 Extracellular OCR Plate Assay Kit	A 社製品	B 社装置
利用測定装置	蛍光 マイクロプレートリーダー	時間分解測定機能付き 蛍光マイクロプレートリーダー	細胞外フラックスアナライザー
原理	りん光	りん光	りん光
波長	Ex=500 nm / Em=650 nm	Ex=380 nm / Em=650 nm	Ex=532 nm / Em=650 nm
装置以外の 専用試薬	無し	無し	無し
薬剤の添加数	1 種類/ well	1 種類/ well	最大4 種類/ well （連続添加）
測定できる項目	細胞外酸素濃度	細胞外酸素濃度	細胞外酸素濃度と 水素イオン濃度

フレックスアナライザーとの比較

フラックスアナライザー（XFe24）と本キットを、同条件（細胞種・細胞数・FCCP 濃度）にて、同日測定しました。
その結果、XFe24 と本キットで相関する酸素消費速度変化のデータが得られました。

ミトコンドリア電子伝達系の阻害

Jurkat 細胞にAntimycin 刺激を行い、ミトコンドリア電子伝達系を阻害した際の細胞の状態変化を、様々な指標から評価しました。
その結果、電子伝達系の阻害により、 ① ミトコンドリア膜電位の低下および ② OCR が低下しました。
また、③ 解糖系を強制的に維持するために、ピルビン酸から乳酸への代謝が亢進することで、 ④ 解糖系全体のNAD/NADH 比が低下し、 さらに、 活性酸素種（ROS）の増加に伴う ⑤ GSH 枯渇、グルタチオン生合成に必要なNADH の減少に伴う ⑥ NADP/NADPH 比の増加を確認しました。