RNA抽出
![植物組織のRNA抽出・精製キット](images/01918_img01.png)
ISOSPIN Plant RNA
ISOSPIN Plant RNA (アイソスピン プラント RNA) は、植物組織からRNA を抽出・精製するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でRNA がシリカへ吸着する原理を応用しており、フェノールやクロロホルムを使用しません。使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカメンブレンは、充分なRNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法とシリカメンブレン上でのDNase I 処理を採用しており、約1 時間で高純度のRNA を抽出・精製できます。
Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA
本製品は、植物組織からのRNA抽出キット「ISOSPIN Plant RNA」専用のオプションバッファー (補助試薬) です。キットのみでは抽出困難な植物試料からでもISOSPIN Plant RNA のPT-Extraction Buffer に本製品を加えるだけで、高収量、高純度なRNAを抽出することができるようになります。
特長
- 高純度RNA
遠心分離による夾雑物の除去とシリカメンブレン上でのDNase I 処理により高純度なRNA抽出が可能です。 - フィルターによる前処理が不要
試料のホモジナイズやろ過を目的としたフィルター処理を必要としません。本キットは遠心分離により夾雑物を沈殿して除去します。 - フェノール、クロロホルムが不要
フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒は使用しません。 - DNase I 添付
DNase I (RNase free) がキットに含まれているため、別途購入の必要はありません。 - 抽出困難な植物試料 (松葉やバラ) にはAssist Buffer添加
いままで困難だったマツ (葉)、バラ (葉、花弁)、ツバキ (葉)、ブドウ (果肉、外皮) などからも効率よくRNA抽出可能です。
プロトコール
-
標準プロトコール (Assist Buffer なし)
-
オプションプロトコール (Assist Buffer あり)
RNA収量の目安
試料 | RNA収量 |
---|---|
ホウレンソウ (葉) | 0.5 µg RNA / mg tissue |
ブロッコリー (芽生え) | 1.0 µg RNA / mg tissue |
キャベツ (種子) | 1.3 µg RNA / mg tissue |
キャベツ (芽生え) | 1.4 µg RNA / mg tissue |
キャベツ (葉) | 0.1 µg RNA / mg tissue |
タケ (葉) | 0.3 µg RNA / mg tissue |
チューリップ (球根) | 0.2 µg RNA / mg tissue |
シロイヌナズナの葉からのRNA抽出(RNA品質の比較)
ISOSPIN Plant RNA およびA社RNA抽出キットを用いて、シロイヌナズナの葉から各社プロトコールに従いRNAを抽出した。抽出したRNAの品質を、バイオアナライザ (Agilent Technologies社) によるRIN値の測定、アガロースゲル電気泳動、および吸光度測定により比較した。
吸光度測定結果とRIN値
-
抽出キット A260 / A280 A260 / A230 RNA収量
(ng / mg tissue)RIN値※ ① A社 1.95 1.13 72 7.8 ② ISOSPIN Plant RNA 2.35 2.69 79 7.5 ※n=2
-
Lane ① : A社キットで抽出したRNA
Lane ② : ISOSPIN Plant RNAで抽出したRNA
各100 ngずつ電気泳動 in 1% Agarose
RNAの吸光スペクトル
![抽出RNAの吸光スペクトル](images/01918_img07.png)
結果
ISOSPIN Plant RNAで抽出したRNAは、A社キットで抽出したRNAと比べて、より高品質であることが確認できた。また電気泳動では、各サンプルの吸光度に基づき同じRNA量を泳動しているが、ISOSPINで抽出したRNAはバンドが濃く、高純度であることが示唆された。
ISOSPIN Plant RNAを用いた他の抽出例はニッポンジーンのホームページよりご参照下さい。
ISOSPIN Plant RNAとAssist Buffer for ISOSPIN Plant RNAの併用によるRNA抽出効率の改善
RNA抽出が困難な植物組織から、ISOSPIN Plant RNAのみ、またはISOSPIN Plant RNAとAssist Buffer for ISOSPIN Plant RNAを併用してRNA抽出を行い、抽出したRNA溶液の吸光スペクトルを比較した。
![RNA抽出効率の改善](images/01918_img05.png)
結果
ISOSPIN Plant RNAだけではRNA抽出が困難な植物組織において、Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNAと併用することにより、RNAの収量や純度を改善することができた。
効果が確認された植物組織
ISOSPIN Plant RNAとAssist Buffer for ISOSPIN Plant RNAの併用によりRNA抽出効率の改善が確認された組織
-
植物組織 収量の目安 マツ (葉)※ 0.1 µg RNA / mg tissue バラ (葉)※ 50ng RNA / mg tissue バラ (花弁)※ 80ng RNA / mg tissue ツバキ (葉)※ 70ng RNA / mg tissue ミカン (外皮)※ 80ng RNA / mg tissue カキ (果肉)※ 30ng RNA / mg tissue ブドウ (果肉)※ 10ng RNA / mg tissue ブドウ (外皮)※ 50ng RNA / mg tissue -
植物組織 収量の目安 バナナ (果肉)※ 15ng RNA / mg tissue コチョウラン (葉)※ 20ng RNA / mg tissue シクラメン (葉)※ 0.1µg RNA / mg tissue イチゴ (葉)※ 0.1µg RNA / mg tissue トマト (果肉)※ 25ng RNA / mg tissue トマト (種子)※ 60ng RNA / mg tissue チャ (葉) 0.6µg RNA / mg tissue
※ISOSPIN Plant RNAだけではRNA抽出が困難な植物組織
Q & A
Q:RNA抽出効率が悪い場合の改善方法はありますか。
- A
- : 試料のホモジナイゼーションまたは溶解が不十分だと、PT Extraction Buffer (植物用) に触れていない細胞内部でのRNA分解が進みます。組織の摘出を素早くすることと、効果的にホモジナイズすることが重要です。
Q:ISOSPIN Plant RNAで抽出したRNAをRNA-seq解析に使用した実績はありますか?
- A
- : 東京大学植物病理学研究室の以下論文にて、RNA-seq解析のRNA抽出に本キットをご使用いただいております。
Tokuda R, Nishikawa M, Hosoe N, Nijo T, Iwabuchi N, Yoshida T, Watanabe K, Maejima K, Yamaji Y, Namba S. (2019) Complete Genome Sequence of a Carrot Torradovirus 1 Isolate, Obtained from Angelica. Micorobiology. 8 (15): e00110-19
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- 【試薬】
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- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
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