同仁化学 NADP/NADPH Assay Kit-WST
本キットは、細胞内の総NADP+/NADPH量、NADPH量およびNADP+とNADPH量の定量、さらにNADP+とNADPHの比率を測定できるキットです。
本キットに含まれる抽出バッファーとタンパク質除去用チューブを用いて簡便に培養細胞から細胞ライセートを調整できます。また、細胞ライセートを加熱処理することで、細胞内のNADPHのみ定量することができ、別途測定した総NADP+/NADPH量からNADPH量を差し引くことで、細胞内NADP+量を求めることができます。
測定原理
NADP＋とNADPHの測り分け操作
プレートアッセイで確かなデータ
本キット同梱の標準液を同時に測定することで、0.01～1 μmol/Lの総NADP+/NADPH量とNADPHの定量解析が行えます。なお、サンプル中の総NADP+/NADPH量が1 μmol/Lより濃い濃度の場合は、サンプルを希釈することで評価できます。
また本キットは、NAD+およびNADHとは反応しないことを確認しています。(下 右図)
細胞を用いた測定例(抗がん剤 Doxorubicin添加)
Jurkat細胞(3 x 106 cells)にDoxorubicin(Dox)を最終濃度500 nmol/Lになるように添加し、24時間培養後にNADP+/NADPH比および還元型/酸化型のグルタチオン比(GSH/GSSG)を確認しました。いずれの測定もPBS洗浄後の細胞を用い、本キットにてNADP+とNADPHの比を、GSSG/GSH Quantification Kit(製品コード:342-09011)にてグルタチオン比を評価しました。
Doxを添加した細胞では、ROS(H2O2)の産生によりDNAダメージを受けてDNA修復酵素(PARP)が活性化し、 NADP+が消費されます。その後、不足したNADP+を補うためNADPH Oxidaseが活性化し、結果としてNADP+が増加するデータが得られました。同時に産生したROSにより還元型グルタチオン(GSH)が消費され、GSH/GSSG比が減少する結果が得られました。
製品一覧
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