同仁化学 γH2AX 検出キット

本製品は、DNAダメージの指標であるγH2AXを二次抗体法で簡便に検出するキットです。初めての方も使いやすいよう、検出に必要な試薬をセットにしております。

γH2AXとは

本キットを用いたDNAダメージの検出原理

DNAダメージにより二重鎖切断が生じると、ヒストンタンパク質の一種であるH2AXが速やか、かつ広範囲にわたってリン酸化されます。リン酸化H2AX(γ H2AX)は、DNAダメージの鋭敏なマーカーであることから、化学物質や活性酵素、紫外線や放射線などの遺伝毒性及び発がん性評価への応用が期待されます。また、γ H2AXの検出は近年では細胞老化を評価する指標としても知られています。

※本製品はモノクローナル抗体研究所製の抗γ H2AX抗体を使用しています。

特長

必要な試薬がセットに

オールインワンなので、すぐに評価できます。

3色のラインアップ

多重染色時に適した色が選択できます。

3ステップの簡便な操作

細胞の固定化と膜透過処理後、キットに同梱している試薬の添加と洗浄操作だけで染色できます。

細胞老化の指標

  • 細胞老化を評価する際は、複数の老化マーカーを指標に解析する必要があります。右に示したマーカーは細胞老化研究分野で広く用いられており、中でもγ H2AXはDNAダメージを伴う老化を判断する際に汎用されています。既に同仁化学研究所より販売しておりますSA-β-gal検出キット(347-09181)とγ H2AX検出キットを併用することで、細胞老化を判断する裏付けのデータとして活用できます。

    ※参考文献:R.Salama et al.: Genes &Dev ., 28,99(2014)

  • 細胞老化の指標
    • DNA damage response
      ex. γ H2AX, ATM, etc
    • SA-β-gal (senescence-associated beta-galactosidase)
    • CDKis (cyclin-dependent kinase inhibitor)
      ex. p16, p21 .etc
    • p53
    • SASP (Senescence-Associated Secretory Phenotype)
      ex. IL6, IL8 .etc

研究報告例

解析対象 論文概要
γ H2AX, SA-β-gal, p16, p21 オートファジー欠損した衛生細胞で細胞老化が認められ、逆にオートファジー誘導剤の添加で細胞老化は抑えられた。
γ H2AX, SA-β-gal, p21 二型糖尿病モデルにて、細胞老化の活性亢進とDNA損傷レベルの増加を確認した。
γ H2AX, SA-β-gal 特定のタンパク質(BRE)を欠損させたマウス線維芽細胞において細胞老化の亢進が見られた。
γ H2AX, SA-β-gal, p16, p21 クロマチン構造変異複合体の一つであるSMARCD1の減少を促すパルミチン酸を処理したHepG2細胞において、細胞老化の亢進が見られた。
γ H2AX, SA-β-gal, p16 DNA修復に関わるErcc1遺伝子欠損マウスにおいては、自発的におきるDNA損傷だけでROSレベルが上昇し、細胞老化の亢進も確認された。

他マーカーと組合せた細胞の評価例

継代数の異なるWI-38細胞を用い、本キットによりγ H2AXを検出、また、SA-β-gal検出キット(347-09181)にてSA-β-galを検出しました。結果、継代を繰り返したWI-38細胞において、γ H2AX由来の蛍光が増大し、 SA-β-gal活性が亢進する結果が得られました。

染色条件

継代数の異なるWI-38細胞を固定化後、Cellular Senescene Detection Kit - SPiDER-βGalにて染色。0.1 % Triton-X/PBSを用い膜透過処理後、本キットにてγ H2AXを染色。

検出条件
γ H2AX(Deep Red) :Ex. 590 - 650 nm / Em. 663 - 738 nm
SA-β-gal :Ex. 533 - 557 nm / Em. 570 - 640 nm
DAPI :Ex. 340 - 380 nm / Em. 435 - 485 nm

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関連製品一覧

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酸化ストレス検出試薬

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