トータルROS検出キット ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

ROS (Reactive oxygen species)は主にミトコンドリアでのATP合成過程で発生する反応性の高い酸素種です。情報伝達のシグナル物質としての役割や、マクロファージなどの免疫機能の一部として重要である一方、DNAやタンパク質に対し酸化剤として作用することで様々な疾病や老化を引き起こす要因となります。
最近の研究では、二価鉄を触媒とし誘発するフェントン反応によって起こる新しい細胞死 (フェロトーシス)の分野においてもROSが注目されてきており、ROSを検出する意義はますます高まってきています1)。ROSを測定する色素としてDCFH-DAが広く使われますが、感度が低くバックグラウンド蛍光との差が明瞭ではありません。本キットはROSを高感度に検出でき、キット付属のBufferを使って染色することで、より細胞にダメージを与えにくい状態でROSを検出することができます。

活性酸素種に対する反応選択性
Highly Sensitive DCFH-DAは活性酸素種（ROS）に対して、DCFH-DAと同様の反応性を示します。
また、DCFH-DAと同様の蛍光特性（λex：505 nm、λem：525 nm）を持つため、同じ励起・蛍光波長での検出が可能です。

1. 96 well Black plateもしくは6 well plateにHeLa細胞 (1×10⁴ cells/ml, MEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)を播種し、
インキュベーター内 (37℃、5% CO₂存在下)で二晩培養した。
2. 培地を取り除きHBSSで細胞を2回洗浄後、DCFH-DAもしくは、Highly Sensitive DCFH-DA Dye working solutionを添加し、
インキュベーター内 (37℃、5% CO₂存在下)で30分間インキュベートした。
3. Working solutionを除去し、HBSSを用いて細胞を2回洗浄した。
4. 上清除去後、100 μmol/lの過酸化水素/HBSS溶液を加えインキュベーター内 (37℃、5% CO₂存在下)で30分間インキュベートした。
5. 上清を吸引除去しHBSSを用いて細胞を2回洗浄後、HBSSを加え各検出器で測定した。