TEVプロテアーゼ (グリセロールフリー) TEV Protease (Glycerol free)

Tobacco Etch Virus由来のプロテアーゼ（TEV Protease）は、特異的な7アミノ酸配列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Serを認識しGlnとGlyの間（もしくはGlnとSerの間）を切断します。本品は、グリセロールを含みません。また、本品は界面活性剤等の添加剤を含まない必要最小限のバッファー組成のため、タンパク質の結晶構造解析等、タンパク質科学研究に用いる試料の調製に適しています。

【概略図】
目的タンパク質とタグの間にTEVプロテアーゼ認識配列(P1’サイト)を挿入しておくことで、TEVプロテアーゼによりタグを目的タンパク質から切り離すことができます。

• 本製品は理化学研究所放射光科学研究センター（生物系ビームライン基盤グループ） 山本雅貴先生、竹下浩平先生との共同研究に付帯する技術支援のもとにニッポンジーンで開発されました。

• TEV認識配列を含む融合タンパク質からタグを切断
  認識配列：グルタミン – アスパラギン – ロイシン – チロシン – フェニルアラニン – グルタミン酸 - (切断部位) - グリシン/セリン
• アフィニティ精製用タグ（8×His、6×HN）が付加されており、反応後、本酵素の除去が容易に可能
• グリセロールフリー
• 界面活性剤等の添加剤を含まない必要最小限のバッファー組成
• 蛋白質科学研究の試料調製に最適

使用例①　各社TEVプロテアーゼ切断効率の比較

基質（タグ融合タンパク質） 2 μgに各社TEVプロテアーゼ※1を加え30℃で60分間反応させ、SDS-PAGEにて確認した。

(※1) 酵素添加量は各社マニュアルに記載の必要量を添加した。

レーン2：本品は1/10量の0.2 μgを添加（31.8 kDaのバンド）
レーンM：Multicolor Protein Ladder

使用例②　Glyの切断を基準にした際の相対的切断率

P1ʼサイトがグリシン残基の基質の切断を基準（100%)とした際の相対的切断率を各アミノ酸残基で比較した。

【結果】

P1ʼサイトがGly/Serの他Arg/Met/Val/Asp/Glnの基質でも効率良く切断できた。

P1’をGly/Ser以外のアミノ酸（Met等）で設計することで、目的タンパク質の１番目のアミノ酸を指定可能。

使用例③　P1’サイトがGly及びMet基質の切断例

P1'サイトがグリシン残基またはメチオニン残基の基質を4℃で16時間反応させ、SDS-PAGEにより切断状況を確認した。

基質の構造

＊ 25.7 kDaと30.0 kDaのタンパク質をTEVプロテアーゼ認識配列で連結した基質を使用

使用例④　各社TEVプロテアーゼの切断効率の比較（Met基質）

P1'サイトがメチオニン残基の基質を4℃で16時間反応させ、SDS-PAGEにて切断状況を確認した。酵素はユニット量を揃えるため各社のユニット表記量を基に添加量を調整した。

各社TEVプロテアーゼの切断効率

レーン	サンプル	切断率(%)
Lane 1	未切断Met基質(コントロール)	-
Lane 2	当社 TEV Protease (Glycerol free)	85
Lane 3	A社 TEV Protease	72
Lane 4	B社 TEV Protease	41
Lane 5	C社 TEV Protease	86
Lane 6	D社 TEV Protease	54
Lane 7	E社 TEV Protease	48